绿色荧光蛋白基因转化早花柠檬创制新种质

• 作 者: 杨阳
• 机 构: 华中农业大学
• 出 处: 华中农业大学
• 发表日期: 2017年期
• 关键词: 早花柠檬 根癌农杆菌 绿色荧光蛋白 遗传转化 转化效率

柑橘是世界上重要的水果之一。但柑橘存在童期长的问题,严重影响了传统育种方法的效率。近年来不断发展的转基因技术为柑橘研究提供了更快速的方法,而采用短童期材料可加速研究进程。本实验以短童期材料-早花柠檬的试管实生苗上胚轴为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行绿色荧光蛋白基因转化,最终得到了8株转基因再生植株。同时对影响早花柠檬转化效率的因素进行了探讨。主要结果如下:1.转绿色荧光蛋白基因早花柠檬植株再生。共进行了7批材料的转化,总计2215个茎段,平均再生芽率60.6%,最高达75%。经体式荧光显微镜检测,表明再生芽平均阳性率1.8%,最高达2.8%。最终8个阳性芽生根并移栽至温室;再生植株茎段和叶片荧光明显,经PCR检测为阳性,表明再生植株均为阳性植株。2.影响转化效率的因素研究。分别设置3个乙酰丁香酮和农杆菌浓度,发现乙酰丁香酮浓度变化对转化率影响不大;转化率随着农杆菌浓度增加而降低,农杆菌浓度OD600在0.6最适宜。转化过程中发现,该基因型暗培一周的上胚轴切口可形成愈伤组织;一般一个切口再生一个不定芽,极少再生多个不定芽,只有极少的两端均再生不定芽;该上胚轴共培后易黄化,切口处再生愈伤能力较弱,部分上胚轴易褐化、不易再生不定芽,即使使用生长状态良好的实生苗依然出现上述情况。