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目的:
研究小鼠局灶性脑缺血后乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)和促血管生成素—2(angiopoietin—2,Ang—2)mRNA表达时相的动态变化,探讨Hpa、VEGF和Ang—2表达的关系及意义。
材料与方法:
1.动物分组:8周龄健康雄性C57/b16小鼠30只,平均体重(20±1.52)g。随机分为实验组和假手术组,实验组按缺血后不同取材时间分为1d、3d、7d和14d,4个亚组,每组6只,假手术组小鼠6只。
2.模型制备:实验组通过颅骨开窗,结扎大脑中动脉分支血管制作小鼠Barrel皮质脑缺血模型。假手术组只开骨窗,不结扎血管。各组小鼠术后行神经行为学评分,1~3分者入选实验。
3.实验动物于预定时间点断头取脑,TTC染色观察脑梗死灶范围。
4.通过Real-Time PCR方法检测局灶性脑缺血后不同时间点缺血区Hpa、VEGF及Ang—2 mRNA表达的动态变化。
结果:
1.实验动物在Barrel皮质缺血后均表现出不同程度的左侧胡须触觉障碍,部分伴有左侧前肢运动障碍。
2.脑缺血后行TTC染色,Barrel皮质梗死区脑组织呈苍白色,正常脑组织区呈鲜红色。
3.Hpa mRNA在局灶性脑缺血后3d、7d、14d在梗死区的表达明显增高(与假手术组比,P<0.05),14天达到相对高峰。实验组缺血侧(右侧)Hpa mRNA表达水平均高于缺血对侧(P<0.05),缺血对侧与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
4.VEGF mRNA的表达在缺血3d开始增高并持续到14d(与假手术组相比,P<0.05),实验组缺血侧VEGF mRNA水平均高于缺血对侧(P<0.05),缺血对侧与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
5.Ang—2 mRNA在缺血3d时显著增高(与假手术组相比,P<0.05),随后逐渐降低,1d、3d、7d缺血侧Ang—2 mRNA水平均高于缺血对侧(P<0.05),缺血对侧与假手术组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:
1.脑缺血可以诱导Hpa、VEGF和Ang—2 mRNA的表达,在缺血早期即可表达上调。Ang—2在3d时显著增高,随后逐渐降低,Hpa和VEGF表达增高持续至14d。
2.脑缺血后VEGF和Ang—2的基因表达上调,提示二者可能参与了促进脑缺血后的血管新生。
3.Hpa与VEGF mRNA表达时相基本一致,推测Hpa可能通过促进VEGF表达来参与脑缺血后的血管新生的过程。