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目的：建立稳定的DNA甲基化检测方法,检测Reprimo及14-3-3σ基因启动子在非小细胞肺癌(NSCLC)中的异常甲基化状态及其与临床病理资料的联系;检测DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR、RG108对人肺腺癌细胞株 A549增殖凋亡的影响以及对RASSF1A基因启动子区域甲基化状态及其表达的影响。 方法：①采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation Specific-PCR,MSP)技术检测60例NSCLC以及癌旁正常组织中Reprimo以及14-3-3σ基因启动子异常甲基化状态;②不同浓度的5-Aza-CdR及RG108对A549细胞进行干预,MTT法检测A549细胞的生长抑制率;流式细胞术检测细胞周期以及凋亡;甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变;RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化;Western blot检测RASSF1A蛋白的表达;彗星试验检测RG108以及5-Aza-CdR对于A549细胞基因组DNA的损伤程度。 结果：①建立稳定的DNA甲基化检测方法MSP法,Reprimo以及14-3-3σ基因启动子异常甲基化在NSCLC组织中发生频率与癌旁正常组织具有显著性差异;Reprimo基因启动子异常甲基化频率与吸烟习惯以及年龄相关;②不同浓度的5-Aza-CdR及RG108可抑制A549细胞生长,并可引起细胞周期G0/G1期阻滞以及显著的细胞凋亡;③经5-Aza-CdR及RG108处理后,RASSF1A基因启动子区域由甲基化状态转变为非甲基化状态,RT-PCR和 Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带(329bp)和蛋白质条带(39 kD),而对照组中没有相应条带出现;④5-Aza-CdR及RG108引起A549细胞基因组DNA的损伤程度具有显著性差异。 结论：①NSCLC中存在Reprimo和14-3-3σ等基因启动子较高频率的异常甲基化;②5-Aza-CdR及RG108可诱导RASSF1A基因启动子区域去甲基化,并通过该机制诱导RASSF1A基因在人肺腺癌细胞株A549中的表达;③RG108相对于5-Aza-CdR,毒性小,作用具有特异性,是一种有研究前景的小分子化合物。