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目的:骨肉瘤(osteosarcoma,OS),起源于间叶组织,是儿童和青少年中最多见的原发性恶性骨肿瘤,约占所有原发恶性骨肿瘤的15%-23%。虽然手术结合新辅助化疗的治疗方式显著改善了骨肉瘤患者的预后,但是,在过去30年里,病人的存活率并没有显著的提升,特别对于产生耐药性的患者或在诊断时就己发生转移的患者,临床治疗效果仍然欠佳,存活率仍然小于30%。因此,探讨骨肉瘤发生、发展的分子机制,并为骨肉瘤的治疗、诊断和预后寻找新的生物标志物是一项重要和迫切的任务。微小RNA(miRNA)是重要的转录后调控因子,这些非编码小RNAs与特异性同源序列靶转录物的3’-非翻译区(3’-UTR)相结合,通常会导致靶基因的翻译抑制和基因的沉默。PDZD2是促进胰岛瘤细胞增殖的多PDZ结构域蛋白,己明确其在前列腺肿瘤发生过程中上调,但是PDZD2在骨肉瘤中的功能仍不清楚。miRNA的失调可以通过其对靶基因的调节促进肿瘤的发生,增殖和转移。本研究调查了 miR-363和PDZD2在骨肉瘤细胞MG-63中的功能,以及miR-363和PDZD2的相互作用关系,以探究miR-363对骨肉瘤细胞的调控作用及其分子机制。方法:收集2016年12月至2018年12月在山东省肿瘤医院行正规辅助化疗后手术切除的骨肉瘤组织和瘤旁正常组织标本共8对。利用qPCR技术对骨肉瘤组织和瘤旁正常组织的miR-363和PDZD2进行检测。进一步利用qPCR技术对成骨细胞和骨肉瘤细胞中的miR-363进行检测:对过表达miR-363的骨肉瘤细胞MG-63进行增殖能力、迁移、侵袭能力等恶性生物学特性和细胞凋亡变化的测定。通过生物信息预测软件发现PDZD2为miR-363的潜在靶标,并发现PDZD2mRNA的3’非翻译区(UTR)含有miR-363的结合位点。将具有PDZD2的全长3’UTR(野生型或突变体)的荧光素酶报告载体转染到MG-63细胞中进行荧光素酶报告分子测定。利用siRNA敲低MG-63细胞中的PDZD2后,检测细胞的克隆形成和侵袭能力。构建裸鼠皮下抑制骨肉瘤模型,观察miR-363对实验动物体内骨肉瘤瘤体生长速度的影响,检测肿瘤组织内PDZD2表达水平和相关蛋白含量的变化。每组实验均进行三次,得出三组数据,结果用三次所得数值的平均值±标准差来表示,使用t检验、单向方差分析或双向方差分析来比较两组或多组之间的差异。所有数据均用SPSS19.0软件(IBMCorp.,Arrmonk,NY,USA)进行统计学处理。p<0.05认为具有统计学差异。结果:通过对8对骨肉瘤组织和瘤旁组织的对比后发现骨肉瘤组织中的miR-363 呈现低表达,而 PDZD2 的表达则升高,且二者表达呈现负调控的趋势。结果有统计学差异。通过对骨肉瘤细胞和正常成骨细胞中miR-363的qPCR检测发现在骨肉瘤细胞中miR-363呈低表达状态,以MG-63细胞较为显著,因此考虑miR-363对骨肉瘤细胞具有调控作用。miR-363在MG-63细胞中的过表达可以显着抑制细胞的活力,增殖和集落形成能力,促进细胞凋亡和G1/S期阻滞。miR-363还可以通过抑制上皮-间质转化(EMT)而抑制MG-63细胞的迁移和侵袭。生物信息学分析和荧光素酶报告基因测定表明PDZD2是miR-363的直接靶标。通过研究发现:miR-363的过表达降低了 PDZD2蛋白水平,抑制PDZD2基因,抑制MG-63细胞的集落形成,迁移和侵袭,通过调节PCNA,caspase-3和EMT表型的表达促进MG-63细胞凋亡。体内研究进一步证实,miR-363通过抑制肿瘤生长,促进细胞凋亡,降低PDZD2和PCNA水平以及肿瘤组织中EMT表型,起到肿瘤抑制剂的作用。结论:miR-363在骨肉瘤的发生发展中发挥着重要的调控作用,作用机制为通过负向调控PDZD2基因的表达,从而有效抑制骨肉瘤的生长。因此,miR-363可以作为治疗骨肉瘤的潜在分子靶点。