原核表达小鼠嗅觉受体MOR28及其多克隆抗体的制备

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哺乳动物每个嗅觉感受神经(OSN,olfactorysenseneurones)从超过数百个甚至上千个嗅觉受体(OR,olfactoryreceptor)基因中,只选择一个进行表达,这种表达调控方式是产生嗅觉的遗传学基础。经过相关研究实验推测,OR的这种表达方式的调控机制包括OR的负调控作用:当每个OSN成功表达一个有功能的OR后,此OR将抑制其它OR的表达,使OSN只表达这个OR。但在此过程中,OR具体是如何反馈抑制其他OR的表达,现在仍不清楚。 OR蛋白进行反馈调控的具体途径有以下几种可能性:1.OR结合到其它转录因子或上游激活因子上,使其失活或活性大大降低,以进行反馈调控;2.OR直接或与其它转录因子共同作用,结合到相关的顺式调控元件上,使此顺式调控元件的活性受到抑制,以进行负调控。 本实验旨在原核表达小鼠嗅觉受体28(MOR28),并制备其多克隆抗体。此抗体将用于对上述OR蛋白反馈调控具体途径的推理进行研究。 以小鼠基因组DNA为模板扩增出小鼠嗅觉受体28基因的部分序列smor28(shortmiceolfactoryreceptor),将其连接到pET28a(+)骨架载体上,构建原核表达载体pMOR28。pMOR28表达载体诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况。利用Ni-NTA琼脂糖提纯表达的目的蛋白SMOR28,SMOR28经透析除盐,冻干浓缩后,免疫兔子制备其抗兔多克隆抗体。经westenblotting检测,SMOR28的抗兔多克隆抗体特异性及滴度较好。
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