【摘 要】
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目的:研究兔阴茎海绵体平滑肌(CCSM)细胞的体外培养方法，兰尼碱受体(RyRs)在CCSM细胞中的表达情况及在胞内[Ca外]i浓度调节中的作用。方法:取雄性性成熟新西兰兔，取出阴茎海绵
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目的:研究兔阴茎海绵体平滑肌(CCSM)细胞的体外培养方法，兰尼碱受体(RyRs)在CCSM细胞中的表达情况及在胞内[Ca外]i浓度调节中的作用。方法:取雄性性成熟新西兰兔，取出阴茎海绵体，用组织块法进行细胞培养，差速贴壁法细胞纯化，利用倒置显微镜观察、免疫荧光染色法鉴定细胞纯度；取3代以内CCSM细胞，通过Genebank查出RyRscDNA序列，针对RyRs3种不同亚型的非同源部分用PrimerPremier5．0软件设计3对引物，以逆转录PCR(RT-PCR)方法分别检测RyRs3种亚型mRNA的表达，凝胶成像系统分析结果；取生长旺盛的CCSM细胞，分为A、B两组，以Fluo-3／AM荧光染色，A组：10umol／L去甲。肾上腺素(NE)激发，B组：50umol／L普鲁卡因+10umol／LNE激发，以激光扫描共聚焦显微镜观察胞内[Ca2+]i浓度变化。结果培养7d开始有细胞从组织块长出，15—20d后长满瓶底，呈典型的“峰一谷”现象，经倒置显微镜观察，见培养的细胞呈现典型的梭形，免疫荧光染色可见细胞内染为绿色的肌丝，证实培养的细胞为CCSM细胞，经差速贴壁法纯化后，细胞纯度接近100％。经RT-PCR检测，CCSM只表达RyRsl，未见RyRs其余亚型的表达；共聚焦显微镜下见细胞胞浆内绿色荧光着色，胞核不着色，A组加入NE发后，胞内[Ca2+]i浓度迅速升高，持续一段时间后下降，升高均值为44．10±6．01％。预先用普鲁卡因处理的细胞，加№激发后，[Ca2+]i浓度上升的幅度及持续时间均减少，升高均值为32．92±4．92％，两组对比有明显差异。结论:CCSM经组织块法培养及纯化后，可以达到很高的纯度，能为其他实验提供纯的CCSM细胞材料；CCSM细胞表达RyRsl亚型；RyRsl参与CCSM细胞的[Ca2+]i调节，虽然可能不是主要作用，但提示我们多角度地开展研究可以更全面地掌握阴茎勃起及ED的本质。
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