对虾抗菌肽PEN3、PEN4的克隆与表达

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抗菌肽产物代表了自然界中广泛存在的先天性免疫宿主第一防线机制。对虾抗菌肽Penaeidins家族有多个成员(PEN-1~5),主要对革兰氏阳性菌及丝状真菌有抗菌活性,对弧菌有干扰作用。本文通过PCR扩增,获得PEN3和PEN4的基因序列,克隆得到大肠杆菌胞浆表达重组载体 pET28a—PEN3、pET28a—PEN4和胞周质表达重组载体pET22b—PEN3、pET22b—PEN4;通过Overlap—PCR的方法获得PEN3和PEN4的嵌合基因,克隆得到重组表达载体pET28a—P3P4;利用同尾酶法构建了PEN3的串联表达载体(PEN3)4-pET28a:并在E.coliBL21(DE3)中表达了上述重组质粒。蛋白电泳分析表明,pET22b—PEN4和pET28a—PEN4均能表达PEN4,且主要以包含体形式存在;pET22b—PEN3能分泌表达PEN3,低温诱导主要以可溶性上清形式存在;嵌合基因pET28a—P3P4产物主要以包含体形式存在,在15℃表达效果最好。抑菌圈检测表明,PEN3对枯草杆菌、藤黄微球菌两种革兰氏阳性细菌具有抑菌活性;PEN4对枯草杆菌、藤黄微球菌和大肠杆菌均具有抑菌活性;嵌合蛋白P3P4包含体复性液对枯草杆菌和溶藻弧菌具有明显的抑菌活性。
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