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1、蝮蛇毒IX因子结合蛋白(AHP IX-bp)的纯化、生化性质鉴定、cDNA序列测定、晶体生长和结构分析研究 AHP IX-bp是从江浙蝮蛇毒中纯化得到的一种新的凝血因子IX结合蛋白,是由一对二硫键连接的异源二聚体,分子量为25kDa左右,A亚基的分子量为15.5kDa,B亚基的分子量为15kDa.测定了AHP IX-bp的N-端氨基酸残基序列以及它的部分cDNA序列.序列比较结果显示,AHP IX-bp和其它蛇毒C-型凝集素类似蛋白的序列同源性很高,并且AHP IX-bp能结合IX因子,不能结合X因子,因此AHP IX-bp是一种从蛇毒中分离得到的新的IX因子结合蛋白.比较AHP IX-bp和其它蛇毒来源的IX/X因子结合蛋白的氨基酸序列显示,IX/X因子结合蛋白序列主要的有效的差别在A56-A67,这一区域的氨基酸残基的差别可能与IX/X因子结合蛋白识别配体的差异性相关.AHP IX-bp与IX因子的结合具有锌离子和pH依赖性,在中性或弱碱性条件下,AHP IX-bp与IX因子的结合能力比弱酸性条件下强得多.为了阐明AHP IX-bp和IX因子结合具有pH依赖性的机理,分别在pH6.5和7.5条件下进行AHP IX-bp的晶体生长实验,获得了可用于X-射线衍射的单晶,并分别收集了2.0A和1.8A的衍射数据.用分子置换法解决了相位问题,测定了AHP IX-bp在两种不同pH条件下的结构.在pH6.5和7.5两种结晶条件下,AHP IX-bp的整体结构很相似,均方差仅为0.122A,但在pH6.5条件的晶体结构中,His B61具有双重构象,这种结构的变化可能与AHP IX-bp活性的pH依赖性相关.AHP IX-bp在两个不同pH条件下结构的差异揭示了IX/X因子结合蛋白与配体结合pH依赖性的结构基础.2、尖吻蝮蛇出血毒素IV降解产物acucetin的纯化、部分序列测定、性质鉴定和初步晶体学研究 AaH IV是Agkistrodon acutus蛇毒中一种P-Ⅲ型的金属蛋白酶,该蛋白在37℃、中性或弱碱性条件下,能很快地发生自降解反应,生成一个稳定的降解产物,命名为acucetin,其分子量约为30kDa.测定的Acucetin的部分序列显示acucetin没有金属蛋白酶结构域,与从蛇毒中分离得到的含有类去整合素结构域和富含半胱氨酸结构域的蛋白序列同源性很高,acucetin也含有类去整合素结构域和富含半胱氨酸结构域.研究发现将反应体系的pH降低到弱酸性范围.AaH IV的自降解速度显著减缓.在pH4.0条件下,能分离得到分子量约为43kDa降解中间产物.Acucetin能抑制ADP和胶原诱导的血小板聚集.在硫酸铵体系中获得了Acucetin的晶体,空间群为R<,32>,晶胞参数为a=b=155.98A、c=76.07A,V<,m>为2.97A<3>/Da,一个独立区仅有一个acucetin分子.获得Acucetin晶体的衍射数据为结构的解析奠定了基础.