莲子心指纹图谱及降血糖体内代谢初步研究

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糖尿病是一种由多病因引起的、以慢性高血糖为特征的终身性疾病。目前尚无根治糖尿病的方法,但通过药物治疗手段可以控制好糖尿病。  到目前为止已经从莲子心药物中分离鉴定出包括生物碱类及黄酮类特征性化合物约有50余种,其中的生药鉴别和药材质量评价也均以这两类成分为指标。中药莲子心作为传统药食两用的药材,具有抗心律失常、降压、降血糖及抗氧化等功效。莲子心降血糖临床疗效显著,现代药理学研究也表明其具有良好的降血糖作用,但是其降血糖机制尚不清楚。  目的:  建立莲子心(Plumula Nelumbinis)的HPLC指纹图谱分析方法,探讨莲子心在大鼠血清中药物代谢成分,旨在为揭示莲子心药效物质基础提供依据。  方法:  采用 Agilent Extend-C18(4.6×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-(10 mM磷酸二氢钾水溶液+0.1%三乙胺)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为282 nm,建立莲子心 HPLC指纹图谱。运用UPLC-Q-TOF-MS定性分析莲子心的成分,同时用此技术初步分析鉴定所采集的给药血清中莲子心的原形成分及代谢产物成分,追踪中药莲子心可能的药效成分。采用 DPPH法和 ORAC法来综合评价莲子心乙醇提取物及其部分单体的抗氧化活性。  结果:  ①建立的莲子心 HPLC指纹图谱的专属性、精密度、重现性和稳定性均良好。②不同产地莲子心样品无论在指纹图谱相似性、聚类分析及生物碱含量方面均存在差异。③利用 UPLC-Q-TOF-MS技术比较得出莲子心的主要化学成分组成,初步鉴定莲子心中22个化合物,通过莲子心乙醇提取物与各组含药血清中成分的对比分析,初步鉴定正常大鼠含药血清中有4个入血原型成分及3个代谢产物,糖尿病大鼠含药血清中有4个入血原型成分及4个代谢产物。④莲子心乙醇提取物及其部分单体都具有抗氧化活性。  结论:  ①本研究建立了能全面反应莲子心化学成分的 HPLC指纹图谱,选择了最优化的色谱条件及检测波长,各组分色谱峰分离度和峰形良好。表明所建方法灵敏度高、稳定性和准确性良好。②通过《中药指纹图谱相似度评价系统》2004版对9批莲子心指纹图谱进行分析,各样品相似度有明显差异,为莲子心质量标准建立提供了可靠的科学依据。同时发现不同产地莲子心中生物碱的含量存在较大差别,这些差异可能对药效产生影响,所以在应用莲子心时,应严格控制原料的来源和质量。③在莲子心乙醇提取物的代谢产物成分中没有鉴定出双苄基四氢异喹啉类生物碱,可能是双苄基四氢异喹啉类通过体内代谢形成了苄基四氢异喹啉类生物碱。④化合物N-Nornuciferine在正常大鼠入血成分中没有检测出来,而在糖尿病大鼠入血成分中被检测到,可能与莲子心降血糖作用有更加直接的相关性。⑤莲子心乙醇提取物及其部分单体具有体外抗氧化活性,为研究莲子心降糖作用机制提供了参考。
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