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目的：研究健脾解毒方逆转草酸铂诱导的人结肠癌耐药细胞(HCT116/L-OHP)的耐草酸铂作用及其与细胞内铂药物含量的关系。并研究铜离子摄入、排出蛋白及GST-π、MRP2蛋白与该方逆转HCT116/L-OHP细胞耐草酸铂作用的关系。
方法：以MTT法确定人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP耐药性，明确健脾解毒方药物血清对HCT116/L-OHP耐L-OHP的逆转作用。通过原子吸收分光光度法测定胞中铂药物的浓度与人结肠癌细胞耐药性关系，检测药物血清对胞内铂药物含量以及细胞对L-OHP摄入排出的影响。采用Western-blot法检测铜转运相关蛋白hCTR1、ATP7A、ATP7B、GST-π和MRP2。
结果：1、人结肠癌敏感细胞HCT116及耐药细胞HCT116/L-OHP对L-OHP的IC50值分别为：7.2及89μg/ml，HCT116/L-OHP的抗性指数(RF)为12.00;联用中药血清干预后HCT116/L-OHP细胞对L-OHP的IC50值为32.45，与单独L-OHP作用相比，逆转指数(RI)为2.74。
2、以原子吸收分光光度法检测细胞内铂含量发现，HCT116/L-OHP细胞比HCT116细胞内铂药物含量明显增多(P＜0.05)，药物血清对HCT116/L-OHP细胞中铂药物含量影响不明显。同样以7.2μg/mlL-OHP分别处理HCT116和HCT116/L-OHP细胞株，HCT116/L-OHP细胞内Pt-DNA含量比HCT116细胞株降低57.64％;HCT116和HCT116/L-OHP细胞株经过7.5%中药血清联合L-OHP处理后比单独L-OHP处理，胞内Pt-DNA含量分别增加23.36%和15.74%。健脾解毒中药复方药物血清可剂量依赖性增加人结肠癌细胞HCT116及HCT116/L-OHP对L-OHP的吸收，同时抑制其排出(P＜0.05)。
3、耐药细胞HCT116/L-OHP与敏感细胞HCT116相比，hCTR1蛋白表达量减少，ATP7A、ATP7B、MRP2、GST-π蛋白表达量增多。中药血清联合L-OHP处理后HCT116/L-OHP中ATP7A、ATP7B表达量相对于单独L-OHP处理组减少，hCTR1蛋白表达增多(P＜0.05)。
结论：1、人结肠癌耐药细胞HCT116/L-OHP可以通过减少胞内铂药物含量，减少细胞核内Pt-DNA含量而对草酸铂耐药，且此过程可能与其铜转入蛋白hCTR1表达降低，铜排出蛋白ATP7A、ATP7B以及蛋白MRP2、GST-π表达增多有关。
2、健脾解毒方可以促进HCT116和HCT116/L-OHP细胞对L-OHP的摄入，抑制其对L-OHP的排出，增加细胞内Pt-DNA加合物含量，从而逆转其耐药株HCT116/L-OHP细胞对草酸铂的耐药性。其逆转人结肠癌细胞耐草酸铂作用可能与上调其hCTR1蛋白，下调ATP7A、ATP7B蛋白表达有关。