芽孢杆菌AMCC100018杀南方根结线虫活性物质的研究

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根结线虫(RKNs)是一种植物病原生物,具有寄主范围广泛、传播途径简单、危害大以及防治困难等特点。根结线虫会侵染作物的根部,阻碍作物对水分、肥料等营养物质的吸收,前期会造成植株矮小、免疫力弱,后期则会造成作物的减产、绝产,甚至死亡,严重的危害了我国农业的发展。芽孢杆菌AMCC100018是由本实验室筛得的一株高效针对南方根结线虫的生防菌株。本研究首先验证了芽孢杆菌AMCC100018的杀虫活性稳定性,然后进行了分离纯化,利用质谱技术分析比对出了活性物质,验证了标品的杀虫活性。主要获得结果如下:芽孢杆菌AMCC100018的LB发酵液具有高效的杀虫活性,发酵48h即可达到最大值。菌株发酵液的杀虫活性具有良好的传代稳定性、耐高温、耐酸碱、无法被蛋白酶酶解,可以长时间见光贮藏。正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和环己烷这四种有机溶剂无法有效的萃取出杀虫活性物质,故杀虫活性物质属于水溶性成分。筛选了四种大孔吸附树脂、两种阳离子交换树脂以及两种阴离子交换树脂,这八种树脂无法有效的吸附杀虫活性物质。选用了XAD1180、XAD16N两种型号的大孔吸附树脂对发酵液进行了预处理,再使用RP-C18、葡聚糖凝胶(Sephndex LH-20)以及制备型液相等技术分离得到了色谱纯的白色物质,使用TLC显色反应以及红外光谱扫描推测其为多肽类或酰胺类。将分离后得到的活性物质使用LC-MS进行分析比对,推测化合物为5-氨基乙酰丙酸、甘油-L-脯氨酸、L-脯氨酰甘氨酸。鉴定了标品的杀虫活性,其中5-氨基乙酰丙酸具有杀南方根结线虫活性,其24h的LC100为0.8mg/mL。
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