【摘 要】
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本实验分别以中国蕙兰未成熟的种子和大花蕙兰的茎尖为外植体，分别研究了中国蕙兰和大花蕙兰的离体再生技术，并在此基础上初步研究了农杆菌介导的转基因技术。结果表明：低盐含量
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本实验分别以中国蕙兰未成熟的种子和大花蕙兰的茎尖为外植体，分别研究了中国蕙兰和大花蕙兰的离体再生技术，并在此基础上初步研究了农杆菌介导的转基因技术。结果表明：低盐含量的1/4MS培养基或PA培养基适合于中国蕙兰和大花蕙兰的离体培养；BA对芽的分化必不可少；活性炭可促进根状茎(类原球茎)的生长，但浓度高于2.0g/L时对芽的分化有一定抑制；NAA与IBA的生根效果均不明显，100g/L香蕉泥对生根壮苗有促进作用。中国蕙兰未成熟种子在无激素的PA培养基上培养7个月可形成根状茎；根状茎在PA+NAA1.0～2.0mg/L+AC1.0g/L培养基上增殖系数接近5，平均长度0.83cm以上；在PA+BA2.0～5.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L培养基上，80％以上的根状茎可以分化，每个根状茎平均分化3个以上的芽；将高1cm以上的芽培养在含香蕉泥100g/L的PA培养基上，60d后96.0％以上的芽可生根，平均生根3.5条，根长3.00cm；移栽后生长茁壮。
在已建立的大花蕙兰离体再生体系的基础上，利用农杆菌介导的转化方法将gfp基因导入大花蕙兰基因组中。经湖霉素筛选，获得了具有抗性的再生苗，通过PCR检测证实，再生苗中含有gfp片断。经实验发现适于大花蕙兰的遗传转化过程为：大花蕙兰PLB切成3mm厚的薄片在分化培养基上暗培养3～5d；农杆菌EHA105(pCAMBIA1300-en-gfp)培养至O.D.值为0.8，离心后重悬于添加As200μM的PA液体培养基中；感染PLB薄片30min，共培养2～3d后转入只添加Timentin100mg/L的分化培养基中培养2～4周，最后转入添加Hy35mg/L和Timentin150mg/L的分化培养基中筛选4个月以上，将1cm以上的抗性芽转至只含Timentin100mg/L的PA培养基中生根。
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