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Müller细胞是视网膜中的主要胶质细胞。它贯穿整个视网膜的全层，支持并包绕着神经元细胞，在视网膜挫伤中起着重要作用。以往的在体研究发现，Müller细胞在视网膜损伤后早期就具有明显的病理改变，但其发生机制仍不清楚。 本课题旨在建立体外培养Müller细胞高压气体冲击损伤模型，并在其基础上，探讨Müller细胞损伤早期的病理变化规律，尤其是胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的变化规律及其与其它病理变化的关系。故此，我们采用透射电镜观察了损伤后细胞超微结构的改变；采用免疫组化和图像分析的方法半定量测定了致伤后早期细胞的GFAP表达变化；并通过生物化学法检测致伤后细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化和TENNEL法原位检测致伤后细胞凋亡率的变化。这对进一步探求Müller细胞发生反应性改变在视网膜挫伤中的发生机制有一定意义。 本实验的研究结果、结论如下： 1．成功地分离培养了SD大鼠视网膜Müller细胞，采用分次贴壁和反复换液冲洗的方法使培养的Müller细胞纯度能达到97％以上。并通过本研究证实Müller细胞是用于体外创伤研究较为理想的细胞。 2．成功地研制了体外培养细胞的高压气体冲击损伤装置，本损伤系统通过微机对致伤参数进行控制，具有可精确控制驱动压力，实时采集信号，使损伤条件更为精确，重复性好，操作简便，结果更稳定等优点，是较好的体外培养细胞创伤模拟致伤装置。 3．首次建立了体外培养Müller细胞的高压冲击损伤模型可通过驱动压力的大小控制细胞的损伤程度。本研究证实，所建立的离体细胞的高压气体冲击损伤模型，是较好的一种体外创伤模型，它可以更好的在细胞水平及分子水平提供创伤病理过昆明医学院硕士学位论文 程中的一些重要信息。4.本研究较为系统的观察了MOller细胞体外损伤后早期的整个病理改变过程和特 点。结果显示细胞损伤的早期，主要由于细胞膜的损伤，致使大量细胞的死亡表 现为台盼蓝染色阳性。随着时间的延长，损伤的后期在继发损伤因素的作用下， 3h后细胞凋亡机制开始启动，这时大量的细胞以凋亡的形式死亡。5.本研究较为系统的检测了Mtiller细胞损伤后早期GFAP表达变化的规律，结果显 示致伤后3h左右GFAP的表达量明显增强，以后24h内持续性高表达，并与损伤 强度呈正比，同时也证实了Muller细胞形态的改变或细胞膜通透性的改变是触发 GFAP表达增强的因素之一。此外，我们还发现在损伤后3h左右GFAP的表达量 增强，细胞凋亡率也明显增高，按其结果所显示，几乎同时启动，说明它们接受 着相同的信号途径，受损后部分Muller细胞凋亡的同时残存活细胞开始代偿性的 肥大、增生。