松材线虫BXGpb1和Bxcap基因的分离与鉴定

• 作 者: 罗梅
• 机 构: 华南农业大学
• 出 处: 华南农业大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 松材线虫 原位杂交 调宁蛋白 BXGpb1基因 Bxcap基因

松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是一种重要的检疫性线虫。松材线虫病被称作松属树种上的“癌症”，该病害的防治工作进展缓慢。随着分子生物学研究的深入，运用分子生物学技术研究其致病机理以及寻找控制该病害的方法成为可能。本文以松材线虫G蛋白BXGpb1基因以及调宁蛋白Bxcap基因为研究对象，首次克隆了松材线虫Bxcap基因的编码区序列，并用RNAi的方法研究了Bxcap基因和BXGpb1基因的功能，同时，用原位杂交的方法对BXGpb1基因在松材线虫上进行组织定位。本研究主要结果如下：
1.用RACE技术，首次获得松材线虫编码调宁蛋白的432bp的cDNA全长序列以及627bp的DNA编码区，命名为Bxcap。DNA编码区包含有3个内含子，4个外显子；3个内含子的大小分别为62bp、65bp和68bp，4个外显子的大小依次为49bp、139bp、205和36bp。该基因与秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)编码的调宁蛋白、cpn-4、cpn-1相似性依次为81.12％、51.30％和27.46％；与Caenorhabditis briggsae CBR-CPN-3、CBR-CPN-4相似性分别为81.12％和51.95％。通过RNAi分析表明该基因在转录水平明显降低，并观察到虫体卷曲、颤抖、抽搐等现象，同时对繁殖率影响较大。接种盘多毛孢(Pestalotiopsis sp.)8天后，沉默后虫数减少了44.5％。
2.运用原位杂交技术对BXGpb1在松材线虫上进行组织定位。结果表明，BXGpb1基因在虫体内分布范围较广，在头架、食道、生殖腺、肛门、肠细胞、肌肉组织以及神经组织等部位都有表达。
3.利用dsRNA浸泡的方法对松材线虫的BXGpb1基因进行沉默试验。结果显示，干扰对繁殖率有很大的影响，接种盘多毛孢8天后繁殖量减少了56.4％。统计表明沉默后其死亡率大幅度升高，干扰48 h后其相对死亡率达97.43％。
本文为植物寄生线虫的基因功能组学研究打下基础，为进一步寻找防治和控制松材线虫的方法提供了新的理论依据。