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背景与目的肺癌发病快、转移率高,是全世界恶性肿瘤患者最常见的死亡原因。据最新世界卫生组织数据显示,肺癌的死亡率位居恶性肿瘤之首。近年来,由于环境等多重因素,女性肺癌的发病率也呈连年上升趋势。肺癌已经成为首位人类疾病杀手,造成了沉重的社会负担。因此,攻克癌症病因、找到解决方法成为人类的首要任务。普遍认为肺癌的发生、发展涉及到很多病理生理反应,是多因素、多机制参与的恶性肿瘤。据流行病学研究发现,肺癌的发病因素主要与个人生活习惯、周围环境、药物使用情况以及个体遗传因素密切相关,但是到目前为止肺癌发病的确切机制依然不完全明了。由于肺部肿瘤中将近85%的是非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC),所以研究非小细胞肺癌的发生发展机制将对肺癌的防治产生重大的影响。随着生物医学研究跨入分子时代,临床肿瘤的治疗也与时俱进的进入到了分子学时代。人类对于疾病的病因、发病机制、预后的研究和认识,也从传统概念深入到分子生物层面。目前,以抑癌基因、癌基因及相关基因研究为主的肿瘤分子研究成为热点领域,一些生物标记分子已经进入临床应用。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)是一种最常见的人类可遗传变异,是基因组内特定单个核苷酸位置上碱基发生改变而造成碱基序列的改变,从而引起基因组DNA序列的多态性。SNPs与疾病的遗传易感性、药物敏感性治疗及患者预后生存率的关系已由大量实验证实。鸟苷酸调节蛋白基因(guanine nucleotide-binding protein, a-stimulating activity polypeptide1, GNAS1)是编码鸟苷酸结合蛋白(GTP-binding protein, G蛋白)的基因,该基因位于染色体20q13.2-13.3,包含13个外显子和12个内含子,是一个复杂位点编码多种重叠转录本。鸟苷酸调节蛋白形式多样,其介导的信号通路在肿瘤的发生发展过程中细胞的瞬时反应和基因长久调节起重要作用,是一种重要的信号分子,近年来研究进展迅速。多项研究表明,GNAS1基因第五外显子T393C的SNPs与多种恶性肿瘤的发生发展、药物敏感性治疗及预后有关。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在人类的细胞膜上广泛分布,是一种蛋白酪氨酸激酶受体。EGFR与配体结合后,形成同源或异源二聚体,激活酪氨酸激酶,启动下游信号转导通路,促进上皮细胞的增殖和分化。目前研究发现,EGFR基因突变与恶性肿瘤患者的临床病理学特征、药物敏感性及预后有关。近年来关于鸟苷酸调节蛋白基因家族SNPs与多种肿瘤之间关系的研究增多,特别是关于GNAS1基因T393C与肿瘤临床病理学特征、疾病的易感性和预后之间的关系。因此,在该实验中对57例非小细胞肺癌患者样本DNA中的GNAS1基因T393C单核苷酸多态性的基因型进行检测；同时检测DNA中的EGFR第18-21外显子基因突变情况,从而探讨GNAS1基因T393C单核苷酸多态性、EGFR基因突变率与非小细胞肺癌的发生发展及临床病理学特征之间的关系,旨在为非小细胞肺癌的基因诊断和治疗提供新的理论依据。材料与方法1.收集2012年12月至2013年3月郑州大学第一附属医院非小细胞肺癌患者术后病理蜡块组织共57例。2.采用离心柱法提取57例非小细胞肺癌患者的蜡块组织中基因组DNA。3.采用聚合酶链式反应-限制性片段长度(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)对57例样本DNA中的GNAS1基因T393C单核苷酸多态性基因型进行检测。4.用扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system, ARMS)对57例样本DNA中的EGFR第18-21外显子基因突变进行检测。5.结果分析：对实验数据进行记录整理,用SPSS17.0统计软件对所以数据进行统计学分析比较,有序分类资料采用秩和检验,无序分类资料采用χ2检验；二分类样本用Wilcoxon检验,对于多分类资料,整体用Kruskal-wallis检验,但是要用Bonferroni法来进行资料中的两两比较；使用Logistic回归模型估算优势比(odds ratio, OR)及其95%可信区间(95%confidence interval,95%CI),同时相对风险度也以OR值及95%CI来代表；检验水准a=0.05。结果1. GNAS1基因T393C单核苷酸多态位点基因型T/T, T/C和C/C基因型频率分别为38.60%(22/57),49.12%(28/57),和12.28%(7/57)；T等位基因和C等位基因的频率分别为63.16%和36.84%。2. GNAS1基因T393C位点基因型分布频率与非小细胞肺癌患者的一般情况(性别、年龄及吸烟史)、原发灶大小、TNM分期、分化程度及病理组织学分型无关(P>0.05)；基因型分布频率与淋巴结是否远处转移有关(P<0.05)。等位基因T、C分布频率与非小细胞肺癌患者的一般情况、原发灶大小、TNM分期、分化程度以及组织学分型无关(P>0.05),等位基因分布频率与淋巴结转移有关(P<0.05)。3.携带T/C、C/C基因型使非小细胞肺癌患者的淋巴结转移风险增加(基因型C/C、T/C与T/T比较,OR值分别为8.500、6.120；用Bonferroni法对基因型两两比较后结果显示：基因型T/T与T/C比较,P<0.05；基因型T/T与C/C比较,P<0.05；T/C与C/C比较,P>0.05。携带C等位基因使非小细胞肺癌患者淋巴结转移的风险增加(等位基因T与C比较,OR值=3.143；P<0.05)。4.57例非小细胞肺癌患者中EGFR突变频率是61.54%(35/57),在发生突变的基因中,15例为外显子21发生突变,为L858R突变,另外20例为外显子19发生的del缺失突变。5. EGFR基因突变与非小细胞肺癌患者的年龄、TNM分期及淋巴结转移无关(P>0.05)。6.女性非小细胞肺癌患者EGFR基因的突变率71.43%(25/35)高于男性患者45.57%(10/22)；腺癌的突变率67.74%(21/31)高于非腺癌53.85%(14/26)；吸烟患者EGFR基因的突变率72.73%(16/22)高于非吸烟患者54.29%(19/35)；肿瘤体积较小(<3cm)、分化程度较好的非小细胞肺癌患者的EGFR基因突变率也相对较高,卡方检验以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1. GNAS1基因T393C位点基因型分布频率和等位基因分布频率与非小细胞肺癌淋巴结转移有关。携带C等位基因使非小细胞肺癌患者的淋巴结转移风险增加。2. EGFR基因突变率与非小细胞肺癌患者的性别、组织学分型、吸烟史、肿瘤体积及分化程度有关。