二化螟寄生蜂中部分共生菌的检测及其系统发育分析

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在昆虫的生殖等生命过程中,共生细菌能起到重要的调控作用。寄生蜂是害虫自然控制的重要因子之一,研究其共生细菌的种类和功能,可丰富对其种群发生和增长机制的认识,并为从内生菌角度探寻提高寄生蜂控害潜能的新途径提供理论依据。二化螟Chilo suppressalis (Walker)是亚洲水稻上危害最严重的害虫之一,其寄生蜂种类繁多,但对其内生菌感染状况及功能的认识十分欠缺。本研究以5种二化螟的主要寄生蜂即二化螟绒茧蜂Apanteles chilonis、稻螟小腹茧蜂Microgaster russata、大螟钝唇姬蜂Eriborus terebrans二化螟沟姬蜂Gambrus wadai和螟甲腹茧蜂Chelonus munakatae为材料,检测了我国6个地区(长春、唐海、仪征、安吉、龙游和乐清)各寄生蜂种群被Wolbachia及其噬菌体WO和Cardinium的感染情况,以及株系的多样性和水平传播情况。基于PCR技术,从供试二化螟寄生蜂中共克隆到32条不同的Wolbachia表面蛋白(Wolbachia surface protein, wsp)基因序列(长度496-594bp),表明所感染的Wolbachia株系十分丰富。发现存在许多双重感染和多重感染现象,其中二化螟绒茧蜂和稻螟小腹茧蜂中的双重感染个体比例分别达到77.8%和31.3%。系统发育分析表明,这些Wolbachia株系均属于A、B组,它们又可细分为6组显著不同的株系。推测其中一些株系在不同寄生蜂之间、寄生蜂和其他昆虫之间发生了水平传播,且ftsZ基因在一些株系之间进行了重组。本次研究共发现15个新的wsp等位基因、26个新的可用于多位点序列分型(Multilocus sequence typing, MLST)的等位基因,由此建立14个新的序列型(Sequence types)。对各寄生蜂不同地理种群中Wolbachia噬菌体WO的orf7基因序列进行了克隆,共得到两个WO株系,其中一个株系发现于二化螟绒茧蜂和稻螟小腹茧蜂的大多数种群以及螟甲腹茧蜂的1个种群中,另一个株系发现于二化螟绒茧蜂和稻螟小腹茧蜂的少数种群中。推测噬菌体WO在不同二化螟寄生蜂之间存在一定程度的水平传播。采用文献中报道的16S rRNA引物,通过PCR技术对二化螟寄生蜂种群中的Cardinium感染状况进行了检测。发现有预测大小的PCR产物生成,但测序结果以及系统发育分析表明它们并不属于Cardinium,而是属于拟杆菌门的鞘氨醇杆菌Sphingobacterium。本次实验结果表明供试的几种二化螟寄生蜂可能均不感染Cardinium。研究结果较大程度上丰富了对二化螟寄生蜂中Wolbachia、噬菌体WO及Cardinium发生状况的认识,且其中的许多Wolbachia和噬菌体WO株系均为新发现,为今后选择有价值的株系开展重点研究奠定了基础。
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