【摘 要】
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目的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)是一种造血细胞增殖和分化刺激因子。越来越多的研究发现,肿瘤细胞能够自分泌GM-CSF,对肿瘤细胞的增殖力、侵袭力和耐药性会产生影响。但是,关于GM-CSF对胃癌进展和耐药方面的研究目前还比较少,更多深层次的相关机制研究也并不清楚。本实验通过检测GM-CSF
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目的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)是一种造血细胞增殖和分化刺激因子。越来越多的研究发现,肿瘤细胞能够自分泌GM-CSF,对肿瘤细胞的增殖力、侵袭力和耐药性会产生影响。但是,关于GM-CSF对胃癌进展和耐药方面的研究目前还比较少,更多深层次的相关机制研究也并不清楚。本实验通过检测GM-CSF对胃癌细胞增殖、迁移的作用以及对氟尿嘧啶(fluorouracil,5-FU)诱导的胃癌细胞凋亡、周期的作用,初步探究GM-CSF对胃癌细胞增殖、迁移和耐药性方面的影响,为研发以GM-CSF为靶点的抗肿瘤药物提供理论依据。方法1.体外培养胃癌SGC7901细胞,平板克隆实验检测GM-CSF对胃癌增殖的作用和影响。细胞划痕实验法观察GM-CSF对胃癌细胞迁移的作用和影响。2.MTT法检测5-FU作用于胃癌细胞的半致死剂量,将GM-CSF添加到5-FU处理的胃癌细胞中,MTT法检测其对细胞活性的影响。3.Annexin V-FITC/PI流式检测细胞凋亡,PI流式检测细胞周期情况。4.Western blotting检测凋亡有关蛋白Bax和Bcl-2的表达差异。结果1.GM-CSF不仅能促进胃癌细胞增殖,也能促进胃癌细胞的迁移。2.5-FU对胃癌细胞的半致死剂量为(16±0.4)mg/L。5-FU对胃癌细胞的活性有明显的抑制作用,GM-CSF能有效减弱5-FU的抑制效果。3.Annexin V-FITC/PI流式检测表明5-FU能诱导胃癌细胞发生明显的凋亡,加入GM-CSF后,5-FU诱导的胃癌凋亡被抵抗。4.流式周期结果显示5-FU和GM-CSF均能导致胃癌细胞周期阻滞,并且两者具有互相拮抗作用。5.Western blotting实验结果显示5-FU诱导的胃癌细胞Bax/Bcl-2比值显著升高,而加入GM-CSF后,5-FU诱导的凋亡被抵抗,Bax/Bcl-2比值升高趋势被抑制。结论在本实验中GM-CSF能够促进胃癌细胞增殖和迁移,并有效抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡和周期阻滞,在增强胃癌细胞化疗耐药性方面具有重要作用,GM-CSF可能通过抑制凋亡相关蛋白Bax的表达从而促进了胃癌细胞的耐药。
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