【摘 要】
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目的:(1)探讨卵巢癌紫杉醇敏感细胞株A2780和紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol P-gp的表达及其水平差异.(2)构建含MDR1启动子的重组荧光素酶报告基因载体,检测MDR1启动子的活性及
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目的:(1)探讨卵巢癌紫杉醇敏感细胞株A2780和紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol P-gp的表达及其水平差异.(2)构建含MDR1启动子的重组荧光素酶报告基因载体,检测MDR1启动子的活性及TSA对其活性的影响,为下一步对多药耐药性卵巢癌细胞进行靶向基因治疗提供实验基础.方法:(1)提取培养细胞的胞膜蛋白,采用Western blot检测膜糖蛋白P-gp的表达.(2)将带有MDR1基因启动子的重组荧光素酶报告基因系统分别转染紫杉醇耐药A2780/Taxol和紫杉醇敏感A2780细胞株,然后比较测定的转染细胞裂解液的荧光素酶活性;同时将转染后的A2780和A2780/Taxol细胞用TSA处理,测定TSA对启动子活性的影响.结果:(1)紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol膜糖蛋白P-gp的表达较紫杉醇敏感细胞株A2780明显增强.(2)A2780/Taxol细胞转染重组质粒pMDR1280后测定的荧光素酶活性是转染带有SV40启动子的pGL3-control质粒的近5倍(P<0.05),而A2780转染pMDR1280后其活性几乎无变化;共转染pMDR1280和pCMV-β的A2780/Taxol细胞经TSA作用后MDR1启动子的功能活性增加了近7倍(P<0.05).结论:(1)紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol中的MDR1基因表达水平远远高于紫杉醇敏感细胞株A2780.(2)MDR1启动子在紫杉醇耐药A2780/Taxol细胞株中表现出比在紫杉醇敏感A2780细胞株中强的转录活性,这种活性在TSA诱导后能够提高.
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