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背景:1.2007年,研究者发现在一部分非小细胞肺癌患者中存在棘皮动物微管相关蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule associated protein like 4-anaplastic lymphomakinase,EML4-ALK)基因存在重排现象,经研究发现这种EML4-ALK融合基因是又一种特异性的驱动基因,这种基因导致肿瘤发生、发展的;这种基因重排发生在2号染色体短臂上,到现在为止,已经发现了多种的框内融合类型,所有的类型中均为相同的ALK断裂位点与不同EML4断裂位点之间的融合[1-9]。蛋白融合后,酪氨酸激酶持续活化,导致下游细胞信号的持续激活[1、2、15]。因此,ALK已经成为靶向治疗的新的靶点。准确的检测出ALK融合突变对于临床来说是至关重要的。肺腺癌及含有腺癌成分的非小细胞肺癌均推荐进行EML4-ALL融合基因检测[15]。2.EML4-ALK融合突变的NSCLC患者接受克唑替尼治疗时取得了非常令人满意的临床疗效,但是我们发现在治疗过程中仍有一小部分患者病情出现快速进展。因此能否在治疗初期对患者疗效多角度进行评估预测对于临床治疗策略的制定来说至关重要,也更加符合个体化治疗的要求。最近几年,人们对蛋白质组学的研究取得了飞速的进展。其中以体液蛋白质组学研究为代表,因其取材容易,也成为临床研究者主要的关注点之一,其中血清(浆)、尿液、脑脊液、唾液等体液蛋白质组学的研究取得了一定成果。目的:MALDI-TOF质谱技术是近年来蛋白质组学研究的一项新技术,这项技术灵敏度高,能够完成高通量检测,操作简单快捷,而且具有很好的再现性、稳定性。在我们这项研究中,预期应用MALDI-TOF-MS质谱分析技术联合铜离子纳米螯合磁珠对ALK+非小细胞肺癌患者血清低丰度蛋白进行研究,试图发现一组特异性血清多肽。其次,我们同样应用MALDI-TOF质谱技术对克唑替尼疗效进行研究,对接受克唑替尼治疗的晚期NSCLC患者血清多肽进行分析,预期发现一组有疗效相关的蛋白或多肽。方法:1.患者血标本来源于2012年8月至2014年10月在我院肺部肿瘤科就诊的非小细胞肺癌患者。留取患者血标本的同时留取患者组织标本并进行FISH检测,根据FISH检测结果将患者分为ALK+组与ALK-组。经过筛选,最终入组患者101名,ALK+组50名,ALK-组51名。经上述患者随机分组,分为训练组和验证组,其中训练组包括30例ALK+患者和30例ALK-患者血清标本,这组患者用来建立分类诊断模型;测试组包括20例ALK+患者和21例ALK-患者血清标本,这组患者对上述模型进行盲法验证。上述患者的血清经铜离子螯合纳米磁珠(MB-IMAC-Cu2+)提取血清低丰度蛋白,然后通过MALDI-TOF质谱仪检测,对蛋白/多肽进行质谱分析。得到的质谱数据进行统计学分析,其中建模组血清多肽用来建立诊断模型。验证组血清多肽提取后带入诊断模型进行验证。2.对接受克唑替尼治疗的晚期nsclc患者进行随访,留取患者基线血标本。随访患者的近期疗效,其中疗效评价为pr、cr、sd的患者定义为疾病控制组,疗效评价为pd的患者定义为疾病进展组,对这两组患者的基线血标本进行多肽提取并进行质谱检测,找出控制组和进展组患者之间的血清差异多肽,用这组多肽来建立诊断模型,最后用验证组患者的血清进行验证。3.临床阶段研究:根据上述疗效预测模型,收集eml4-alk融合突变患者治疗前血清,通过分类模型预测为克唑替尼优效组合劣效组。上述两组患者均一线口服克唑替尼靶向治疗,对患者进行疗效评价以及生存随访,研究终点为pfs。结果:1.研究发现alk+nsclc患者与alk-nsclc患者血清存在差异多肽,共发现115个差异多肽峰,质荷比(m/z)均集中在800-10,000da范围。经统计学分析后发现有90个多肽峰(定义两组p<0.05的多肽峰具有统计学差异)具有统计学差异。59个在alk+血清中高表达,31个在alk-血清中高表达。运用三种算法建立诊断模型,并筛选出ga算法为最优算法,5个多肽峰(7477.49da,7406.42da,7655.84da,6053.24da,9307.35da)建立分类模型,然后对测试组进行验证,该模型准确率为85.73%(34/41),敏感性为70%(14/20),特异性达100%(21/21)。2.接受克唑替尼治疗的nsclc患者中共有50人符合入组标准,根据随访结果分为疾病控制组25例,疗效评价为cr+pr+sd;疾病进展组25例,疗效评价为pd。然后将上述血清标本随机分组:分为训练组和验证组,训练组患者的血清多肽识别后用以建立诊断模型;验证组患者的血清多肽提取后对诊断模型进行盲法验证。结果发现,经多肽提取及质谱检测发现了疾病控制组和疾病进展组患者之间存在血清多肽差异,经统计学检测,发现62个多肽峰存在统计学差异,其中41个在控制组患者的血清中高表达,21个在进展组患者的血清中高表达,经三种算法建模分析后选取ga算法为最优算法,并筛选出5个多肽峰(1046,1277,2768,6636,6858da)建立诊断模型,然后进行盲样验证,得到敏感性80%(8/10),特异性60%(6/10),准确率60%(6/10)。3.临床阶段研究发现接受克唑替尼治疗的患者治疗初期进行血清多肽提取带入分类模型,分为控制组和进展组,对两组患者的生存随访发现,控制组患者中位pfs10个月,进展组患者中位pfs5个月,具有统计学差异。结论:1.本研究初步揭示了alk+与alk-非小细胞肺癌患者血清存在明显的多肽差异,这些差异多肽或可作为alk检测有潜在价值的生物标志物,后期可进一步对这些多肽进行身份识别及功能研究。本研究建立了ALK+与ALK-NSCLS血清分类识别模型,经验证该模型经验证后具有一定的敏感性与特异性。2.应用MALDI-TOF质谱技术进行蛋白质组学研究发现了和克唑替尼疗效相关的一组血清多肽。我们通过这组多肽成功的建立了分类模型,该模型经临床验证,能将克唑替尼疗效差异的两组患者识别开来。背景:肺癌目前在恶性肿瘤范围内无论是发病率及死亡率均居首位。大多数患者被诊断时已处于无法治愈的晚期或局部晚期[62]。肺癌根据组织学和分子生物学分类分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌两大类,其中非小细胞肺癌约占肺癌总数的80-85%。早期诊断对于患者的预后至关重要,高危人群低剂量螺旋CT筛查,能降低20%的死亡率。手术切除肿瘤仍是早期肺癌的推荐治疗方案。但是,大约70%的非小细胞肺癌患者发现时就已经处于侵袭性的局部浸润或远处转移,因而丧失手术治疗时机。进展期的疾病的患者(IIIB/IV期),预后较差,5年生存率估计为15.9%左右。晚期或局部晚期非小细胞肺癌患者临床指南推荐两药联合方案作为一线治疗。第三代化疗药物,带表药物为紫杉醇、吉西他滨、长春瑞滨、多西紫杉醇,有它们联合铂类组成的铂二联化疗方案已经成为晚期非小细胞肺癌的标准治疗方案[63]。培美曲塞是多靶点叶酸抑制剂,能够抑制一些列的叶酸代谢需要的酶(包括胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶),从而抑制肿瘤细胞的增殖[64]。培美曲塞是目前推荐的晚期非小细胞肺癌一线治疗用药。目的:本研究对比培美曲塞铂二联方案与紫杉醇脂质体铂二联方案治疗晚期非小细胞肺癌患者,比较两组的近期疗效、疾病无进展时间以及主要的药物相关不良反应。方法:此项研究为回顾性研究,数据来源为我院肺部肿瘤科患者数据库,数据库包括患者的一般临床特征,病理类型,治疗方案以及2年的治疗随访数据。根据入组标准从2012年7月-2014年7月在我科接受治疗的非小细胞肺癌患者中进行筛选。共入组患者88例,其中接受培美曲塞方案化疗的患者47例,接受紫杉醇脂质体方案化疗的患者41例,两组患者均为初始治疗。本研究的主要研究终点为患者的近期疗效,次要终点为疾病无进展时间以及药物主要相关不良反应。结果:1.培美曲塞铂二联与紫杉醇脂质体铂二联方案治疗晚期非鳞非小细胞肺癌时,两方案的近期疗效相近,两组的有效率分别为31.9%和21.9%,无统计学差异(P=0.295);两组的疾病控制率分别为72.3%和60.9%,比较无统计学意义(P=0.258)。2.采用培美曲塞与铂类联合的铂二联方案治在疗非鳞非小细胞肺癌时相比较紫杉醇脂质体铂二联方案患者能取得更优的疾病无进展时间。两组中位PFS分别为7个月及4.8个月,差异有统计学意义(P=0.020)。3.两种治疗方案的患者均出现骨髓抑制、恶心、呕吐、脱发、乏力、转氨酶升高、肾功能异常等不良反应,其中骨髓抑制以及胃肠道反应方面,两组比较无统计学差异,培美曲塞组患者脱发发生率低于紫杉醇脂质体组,分别为10.6%和39%(P<0.05),两组具有统计学差异。结论:应用培美曲塞铂二联方案与紫杉醇脂质体铂二联方案在治疗晚期非鳞非小细胞肺癌时,两组患者的近期疗效相似,培美曲塞组与紫杉醇脂质体组相比具有更长的疾病无进展时间。两组患者主要的药物相关不良反应均表现为血液学毒性及消化系统毒性反应。其中培美曲塞组脱发率低于紫杉醇脂质体组。