【摘 要】
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该实验用PCR扩增的SPA基因重组构建了pUC19克隆质粒和pBV220表达质粒.重组表达质粒表达的SPA具有和人、猪、豚鼠血清相结合在琼脂扩散试验中出现沉淀线的生物学活性,其效价高
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该实验用PCR扩增的SPA基因重组构建了pUC19克隆质粒和pBV220表达质粒.重组表达质粒表达的SPA具有和人、猪、豚鼠血清相结合在琼脂扩散试验中出现沉淀线的生物学活性,其效价高达1:256.用胶体金标记SPA,成功地进行了甲、乙、丙型肝炎病毒IgG抗体及抗-HBc、抗-HBe和抗-HBs抗体的检测.该实验应用胶体金标记抗人μ链单克隆抗体,抗人IgG,SPA,抗-HBs单克隆抗体等进行了胶体金免疫渗滤法和胶体金免疫层析法,成功地建立了检测甲型肝炎病人血清的抗-HAVIgM抗体和甲、乙、丙型肝炎的IgG抗体.特别是建立了多重胶体金免疫层析法在同一张检测卡(试纸条)上同时检测甲、乙、丙型肝炎的感染或乙肝五项血清学指标,有相当大的实用价值,虽然做的病例较少,但其实验结果还是较为满意的.检测唾液中的抗-HAVIgM抗体对儿童紧急预防甲型肝炎流行查体很有意义,该实验进行了探讨并取得初步结果.该研究均以ELISA法为参照标准,其特异性、敏感性和总符合率都在95%以上.其中斑点金免疫渗滤法在5min内肉眼观察结果,免疫层析在3-15min内肉眼观察结果.该研究还以硝酸纤维素薄膜为固相支持物,初步探讨了肽芯片的实验方法.用胶体金标记物和两种荧光色素标记物检测待检样品,初步结果比较满意.
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