【摘 要】
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目的：构建表达红荧光蛋白mChen'y的重组B组柯萨奇病毒3型(coxsackievirus B3,CVB3)，用于观察CVB3致病性和感染。
方法：将mCherry编码序列克隆到CVB3基因组的开放读码框5端，
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目的：构建表达红荧光蛋白mChen'y的重组B组柯萨奇病毒3型(coxsackievirus B3,CVB3)，用于观察CVB3致病性和感染。
方法：将mCherry编码序列克隆到CVB3基因组的开放读码框5端，获得质粒pCVB3-mCherry，酶切及测序鉴定。转染HeLa细胞观察mCherry表达和细胞病变。恢复病毒后，噬斑试验纯化病毒并测定病毒毒力。用重组病毒CVB3-mCherry感染Balb/c小鼠观察CVB3在体内的感染情况。CVB3-mCherry在HeLa细胞中连续传带，RT-PCR扩增、TA克隆后测序。
结果：成功构建pCVB3-mCherry:转染HeLa细胞观察到mCherry表达及细胞病变。经噬斑试验纯化病毒并测定病毒毒力为9.308×106pfu/mL。通过腹腔注射病毒感染Balb/c小鼠后可观察到病毒感染部位及其病毒感染量。重组病毒CVB3-mCherry从第2代就开始出现基因丢失，测序结果表明由于病毒开放读码框架移位或部分丢失导致致死性突变。
结论：成功构建了表达红色荧光蛋白mCherry的重组CVB3毒株CVB3-mCherry。mCherry的表达可以示踪CVB3-mCherry在细胞和小鼠的过程感染。mCherry的插入导致CVB3基因组不稳定。由于CVB3-mCherry的基因组重组均导致致死性突变。CVB3-mCherry仅能用于短期实验观察，且毒株必须经过噬斑纯化。
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