甘蔗黄叶病毒分子检测及ScYLV-CP基因克隆

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甘蔗是最重要的糖料作物,占我国食糖产量的90%以上,同时它也是一种重要的绿色能源作物。甘蔗属于无性繁殖作物,病毒的累积使病害逐年加重。甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)引起的甘蔗黄叶病亦称黄叶综合症是我国和世界甘蔗生产中最主要的病害之一,造成产量下降、品质变劣和品种种性退化。培育抗病品种是最有效的治理措施,其次是采用脱毒种苗。 由于甘蔗遗传背景复杂,常规杂交育种获得抗黄叶病且产量品质等目标性状兼优的甘蔗品种需耗时至少10年方可能,植物基因工程技术改良的进步使甘蔗品种抗病性的转基因改良成为可能。 根据GENBANK已经公布的甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)碱基序列,自行设计了一对特异性引物YLSCP18和YLSCP573,同时采用Irey博士设计的一对特异性引物YLSR462和YLSF111,进行甘蔗带毒检测,建立了RT-PCR检测技术。以病叶提取的总RNA为模板,采用RT-PCR获得2个ScYLV外壳蛋白(CP)基因的核心片段,回收并纯化目的片段后,连接到克隆载体pMD-18-T上,通过菌落颜色和酶切鉴定筛选重组子,测序分析显示这2个片段分别为352bp和556bp。序列比对显示这两个片段为ScYLV-CP基因编码区的部分序列,与国外学者分离自不同地理来源的ScYLV-CP基因同源性达95%以上。研究结果可为甘蔗带毒检测提供关键技术,并为利用转基因技术改良甘蔗抗黄叶病性奠定基础。
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