汉防已甲素诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及对Bax、Caspase-3的影响

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目的: 本实验采用汉防己甲素作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2,抑制其增殖,诱导细胞凋亡,并从分子水平探讨发生的可能机制。 方法: 1 汉防己甲素抑制HepG2细胞增殖的实验研究。应用噻唑蓝比色法(MTT)检测HepG2肿瘤细胞对汉防己甲素的药物敏感性;应用流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变。 2 汉防己甲素诱导HepG2细胞凋亡研究。应用倒置显微镜、光镜、透射电镜观察细胞凋亡形态的改变;应用流式细胞仪、TUNEL原位检测法检测细胞凋亡率。 3 免疫组化法检测 Bax、Caspase-3的表达。 结果: 1 汉防己甲素对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用研究: 1.1 汉防己甲素对HepG2的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。MTT检测表明汉防己甲素对人肝癌HepG2细胞的增殖有剂量-效应关系,随浓度的升高,抑制率升高;其半数抑制浓度为(IC50)约为9.3mg/L; 1.2 当汉防己甲素浓度为8.0mg/L时,细胞主要阻滞在G1期;当汉防己甲素浓度为9.3mg/L、10.5 mg/L时,细胞主要阻滞在G2期。 2 汉防己甲素对体外肝癌细胞株HepG2凋亡的影响: 2.1 加入汉防己甲素24h后,与对照药组相比,细胞形态发生显著变化。倒置显微镜下观察发现细胞体积缩小,变圆,胞浆量减少,并随着药物浓度增加,贴壁细胞逐渐减少,悬浮细胞增多;HE染色光镜观察到HepG2细胞胞核内染色质呈半月形凝集,且用药组分裂相细胞减少;透射电镜下观察,用药组细胞核明显缩小,核浆比减小,核内异染色质明显增多,并在核膜边缘聚集增多,核膜完整,并出现了自噬体。 2.2 流式细胞直方图上均可见亚二倍体峰,且凋亡率随用药浓度的增大而增大。 2.3 TUNEL法原位检测时,汉防己甲素作用24h后,棕色阳性信号位于细胞核,染色质浓缩,于核膜下呈斑块状和新月形;细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01) 3 免疫组化方法测Bax、caspase-3的表达:用药组细胞的Bax、Caspase-3表达明显增强,这可能是Tet诱导HepG2凋亡的机制之一。
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