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紫外线(UV)照射导致的氧化损伤是人晶状体上皮细胞凋亡的原因之一,而小窝蛋白(Caveolin)参与晶状体上皮细胞凋亡过程。本实验拟研究UVB照射人晶状体上皮细胞造成的氧化损伤中Caveolin-1mRNA表达变化与晶体上皮细胞凋亡之间的关系,同时探讨阿司匹林作为抗氧化剂对Caveolin-1mRNA表达及晶状体上皮细胞凋亡的影响。
研究方法:
波长范围(250-365nm)的UVB(4.43mw/cm2)照射人晶状体上皮细胞系SRA01/04(0s,5s,10s,20s),按照是否加入阿司匹林(Aspirin)分为实验组和对照组。
1、MTT法检测细胞活性;
2、流式细胞仪检测活性氧自由基ROS量;
3、RT-PCR检测诱导型一氧化氮合成酶iNOS的含量:
4、AnnexinV-EGFP法,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率;
5、real time RT-PCR方法定量分析Caveolin-1 mRNA的量随照射剂量不同,及加入抗氧化剂前后所产生的变化。
结果:
随紫外线照射时间延长,单纯紫外线照射组细胞活性下降,iNOS含量降低,ROS量及细胞凋亡率增加,Caveolin-1mRNA表达量下降。加入阿司匹林后,各组ROS产生量降低,细胞活性增加。5s和10s组细胞凋亡率较对照组下降,Caveolin-1 mRNA的表达量较对照组升高(P<0.05)。但是照射20s的条件下,加药后的细胞凋亡率及Caveolin-1 mRNA的表达量较未加药组无变化(P>0.05)。
结论:
紫外线照射可产生ROS造成人晶状体上皮细胞凋亡,Caveolin-1mRNA表达量减少,推测Caveolin-1表达量的变化可能与凋亡有关。低剂量的阿司匹林(3μM)作为抗氧化剂可以在一定程度上减少UV照射造成的晶状体上皮细胞凋亡,增加Caveolin-1的表达;但大剂量的阿司匹林(>30μM)会起到相反的作用,因此找到一个合适安全的剂量范围具有一定临床意义。