论文部分内容阅读
目的:通过严格的体外实验,研究丹参酮IIA与ATRA诱导NB4细胞(含t(15,17)易位、表达PML-RAR α融合蛋白的人急性早幼粒细胞白血病细胞株)分化过程中粘附分子(CD44、CD54(ICAM-1))的变化。
方法:根据浓度梯度实验结果,实验共分为6组:阴性对照组:1组(含0.1g/LDMSO);单独作用组:2组(10 μg/mlTanⅡA磺酸钠)、3组(0.5μg/mlATRA);联合作用组:4组(10 μg/mlTanⅡA磺酸钠+0.5μg/ml ATRA)、5组(10μg/mlTanⅡA磺酸钠+0.25μg/ml ATRA)、6组(10μg/mlTanⅡA磺酸钠+0.125μg/ml ATRA),每组设3个样本。各组中细胞浓度均为2×105/ml,培养体系总体积为10ml,置于37℃、饱和湿度、5%CO2的孵箱中悬浮培养5天。
①用台盼蓝拒染试验连续5天计数活细胞,绘制生长曲线并计算第5天的生长抑制率;
②加药后分别于24h、72h、120h取沉渣细胞涂片,Wrights-Giemsa染色,观察形态学变化,计算细胞诱导分化率;
③加药后分别于24h、72h、120h取细胞行NBT还原实验计算阳性细胞百分率;
④加药后分别于24h、72h、120h取细胞用流式细胞仪检测细胞表面粘附分子CD44和CD54(ICAM-1)的表达。
结果:
①TanⅡA磺酸钠、ATRA对NB4细胞有明显的生长抑制作用,联合作用组第5天生长抑制率明显高于单独作用组(P<0.05),但联合作用组间比较无显著差异(P>0.05)。
②TanⅡA磺酸钠、ATRA组NB4细胞的诱导分化率、NBT还原阳性率明显高于阴性对照组 (P<0.05),联合作用组诱导分化率、NBT还原阳性率明显高于单独作用组(P<0.05),但联合作用组间比较无显著差异(P>0.05)。24h、72h、120h相比诱导分化率、NBT还原阳性率.有显著差异(P<0.05),分组与时间存在交互作用(P<0.05)。
③流式细胞术检测细胞表面CD44、CD54(ICAM-1)平均荧光强度:分析显示TanⅡA磺酸钠对NB4细胞的粘附分子(CD44、CD54(ICAM-1))的影响与阴性对照组相比有一定程度的降低但无统计学差异(P>0.05)。ATRA处理后CD44表达减弱、CD54表达增强(P<0.05),与联合作用组比较无显著差异(P>0.05);24h、72h、120h相比粘附分子的表达有显著差异(P<0.05),分组与时间存在交互作用(P<0.05)。
结论:
①TanⅡA磺酸钠、ATRA对NB4细胞有明显的增殖抑制作用,两药联合有协同作用,但联合抑制作用对ATRA的剂量依赖不明显。
②TanⅡA磺酸钠、ATRA对NB4细胞有明显的诱导分化作用,两药联合有协同作用,表现为时间依赖性,但联合诱导分化作用对ATRA的剂量依赖不明显。
③TanⅡA磺酸钠对NB4细胞的粘附分子(CD44、CD54(ICAM-1))的影响无统计学意义。ATRA对NB4细胞的粘附分子(CD44、CD54(ICAM-1))的影响,表现为经ATRA处理后CD44表达减弱、CD54表达增强,呈时间依赖性,但对ATRA的剂量依赖不明显。