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目的Treg细胞是CD4+CD25+T细胞的亚群,Foxp3蛋白是其特异性标志。Treg细胞具有负性免疫调节作用,促进肿瘤的免疫逃逸,抑制机体的抗肿瘤效应。外周血中Treg水平升高,提示肿瘤患者体内免疫抑制程度加重。目前,Treg细胞已成为肿瘤免疫治疗的研究热点。本实验通过测定Treg细胞比例在不同分期乳腺癌患者外周血中的变化及化疗对Treg细胞比例的影响,了解Treg细胞比例变化与乳腺癌临床病理特征的相关性及化疗对其的影响,以期为乳腺癌提供新的可能的预后预测因子及判断新辅助化疗疗效的指标。材料与方法1.分组:收集2009年3月-2010年12月期间病例,包括20例健康人群(对照组)、20例乳腺良性疾病(良性组)及54例乳腺癌患者(乳腺癌组),乳腺癌组包括0期(DCIS)7例,I期9例,II期22例(IIA 11例,IIB 11例),III期10例,IV期6例。2.治疗方法:良性组均经MMT微创手术治疗;DCIS、I、IIA期患者行保乳/改良根治术治疗,DCIS患者不行化疗,I、IIA期患者20例(I期9例,IIA期11例),行FEC或FEC-T方案辅助化疗6程;IIB、III期患者21例(IIB 11例,III 10例),行TEC方案新辅助化疗3程后行疗效评估;IV期乳腺癌患者行TEC/NP/NX等方案姑息化疗。3.标本采集:采集所有入选病例治疗前外周静脉血4ml; I、IIA期患者术后1周(即化疗前1天)外周血4ml,化疗结束后第10天外周静脉血4ml; IIB、III期患者新辅助化疗后第10天外周静脉血4ml。4.外周血标本处理:新鲜外周血采用Ficoll密度梯度离心法分离采集单个核细胞。5.流式细胞仪检测:采用鼠抗人单克隆抗体抗CY5-CD4,抗PE-CD25,抗FITC-FOXP3标记Treg细胞,经流式细胞仪检测,计算获得阳性细胞以( x±s)百分数表示,Treg细胞比例以Treg细胞/CD4+ T百分数比例表示。6.数据分析采用spss13.0统计软件,组间比较采用独立样本T检验,组内比较采用配对样本T检验,多因素分析采用linear-regression。结果第一部分不同临床分期乳腺癌患者外周血Treg细胞比例的变化及意义1.1乳腺癌组外周血中Treg细胞比例为(1.34±0.51)%,较良性组(0.81±0.21)%及对照组(0.75±0.19)%均显著升高,差异有统计学意义(p<0.05);而良性组Treg细胞比例与对照组比较无显著性差异(p>0.05)。1.2各期乳腺癌患者外周血中Treg细胞比例均较良性组升高,并随临床分期的进展呈上升趋势。I～IV期乳腺癌患者Treg细胞比例与良性组相比均有统计学差异(p<0.05),其中III期与IV期患者Treg细胞比例较I期与II期患者显著性升高(p<0.05),0期Treg细胞比例与II期以上乳腺癌相比有显著性差异(p<0.05)。1.3乳腺癌患者外周血Treg细胞比例与肿瘤病理特征的多重线性相关分析结果提示:Treg细胞比例与原发肿瘤大小,组织学分级、淋巴结侵犯情况、Her-2状况呈正相关(p<0.05),与年龄、ER受体状况无相关性(p>0.05)。对各病理特征进行分层分析提示:原发肿瘤直径大于2cm、病理组织学分级III级、淋巴结阳性及Her-2阳性时,Treg细胞比例分别比原发肿瘤直径小于2cm、病理组织学分级I、II级、淋巴结阴性及Her-2阴性时明显升高,差异均有统计学意义(p<0.05)。第二部分化疗对乳腺癌患者外周血Treg细胞比例变化的影响及意义2.1辅助化疗对外周血Treg细胞比例的影响:I、IIA期乳腺癌化疗后外周血Treg细胞比例为(0.92±0.32)%,较化疗前(1.13±0.43)%显著下降(p<0.05)。2.2新辅助化疗对外周血Treg细胞比例的影响: IIB与III期乳腺癌新辅助化疗有效的患者共17例,其中CR的患者3例,PR的患者14例,其Treg细胞比例均比化疗前显著下降(P<0.05);SD患者4例,其Treg细胞比例与化疗前相比无显著性差异(P>0.05)。结论1.乳腺癌患者外周血Treg细胞比例较对照组和良性组明显升高,并随乳腺癌临床分期进展呈上升趋势,提示Treg细胞比例增高可能抑制机体的抗肿瘤效应,参与乳腺癌的发展过程。2.乳腺癌患者外周血Treg细胞比例与临床分期、原发肿瘤大小、病理组织学分级、淋巴结侵袭、Her-2状况等临床病理特征呈正相关,提示Treg细胞可能对评估乳腺癌的预后有重要意义。3.化疗可降低乳腺癌患者外周血Treg细胞比例,从而减轻Treg细胞对机体的免疫抑制作用,提示Treg细胞可能会成为乳腺癌免疫治疗靶点之一。4.新辅助化疗后PR、CR的患者外周血Treg细胞比例显著下降,与化疗前相比有统计学意义,提示外周血Treg细胞比例可能会成为新辅助化疗疗效评估的指标之一。