基于核酸适配体—多孔硅生物芯片检测谷物中多元真菌毒素

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真菌毒素具有极强的毒性,是谷物中常见污染物,会使谷物霉败变质、产品品质下降,对人和动物有致畸、致癌、致突变等作用。目前检测真菌毒素的方法较多,但是存在很多缺点,如:设备昂贵、步骤繁琐、检测成本高、对于痕量毒素残留检测灵敏度不够等。多孔硅比表面积大,结合位点多,当应用于检测毒素时,可以检测到浓度更低的毒素,而且多孔硅价格相对便宜,操作相对简单,因此本文基于多孔硅-核酸适配体技术应用芯片扫描仪建立了 一种检测谷物中真菌毒素的方法。本文应用电化学刻蚀方法,以P型单晶硅为材料,制备多孔硅。为增加多孔硅的稳定性,在多孔硅表面旋涂一层Ti02。利用多孔硅表面修饰的环氧基来共价结合修饰了荧光基团的核酸适配体和修饰了荧光猝灭基团的互补链的杂交链,当毒素通过时,核酸适配体会与毒素结合而和互补链分开,荧光值因此增加。通过测量加入毒素后的荧光增加值即可以定量检测OTA、AFB1和FB1。应用本文建立的方法,通过优化反应条件,分别建立了三种毒素的检测标准曲线,其中赭曲霉毒素A的检测线性范围在0.01~10ng/mL,检测线为0.01ng/mL,线性方程:y=241.3997x+1858.7973 (R2=0.9935);黄曲霉毒素B1的检测线性范围在0.001 ~1ng/mL,检测线为 0.001ng/mL,线性方程:y=339.8828x+1888.4533 (R2=0.0.9960);伏马毒素B1的检测线性范围在0.01~10ng/mL,检测线为0.01ng/mL,线性方程:y=595.8202x+2772.2389 (R2=0.9899)。以OTA为例,检测不同谷物中的加标回收率。本方法测得的加标回收率分别为:小麦为92.69±3.26%~101.80±2.80%,大米为 86.06±1.29%~100.66±1.44%,玉米为85.74士2.75%~99.92±1.63%,总回收率在80%~110%之间,表明本方法测得的不同谷物中加标回收率有效。在单组份检测OTA、AFB1和FB1的基础上,根据最优反应条件,建立了同时检测三种毒素的方法,实现了对多元毒素的定量检测,其中OTA的检测线为0.1 ng/mL,AFB1的检测线为 0.01 ng/mL, FB1的检测线为 0.001 ng/mL。将本文实验方法与ELISA方法测得的加标回收率相对比,结果显示两种方法有较好的相关性,表明本文中的方法具有一定的可行性。
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