论文部分内容阅读
生物医药科技以及体外诊断技术突飞猛进，带动了即时检测(Point of caretest，POCT)技术的显著发展。相对于实验室大型分析仪器，POCT可以实现患者床边检测，而无需专业医护人员操作，可以有效地节约临床样本处理和转移的时间，提高诊断的效率。尤其对于心脏疾病，POCT可以在症状出现时立刻对患者进行诊断，大大降低了心脏疾病的致残率和致死率。以巨磁阻(Giantmagnetoresistance，GMR)免疫技术为代表的磁敏免疫技术，相比传统免疫技术具有高灵敏度、低背景噪音、便于集成化、多通道检测、检测仪器低廉等众多优点。因此，把GMR免疫检测技术集成在POCT检测产品当中，并应用于心衰标志物的联合检测，势必会在体外诊断领域发挥巨大的作用。 本课题是建立多靶标心衰标志物磁敏免疫快速检测系统，实现心衰标志物检测的集成化、自动化、快速化和微型化。本论文的具体研究内容如下: (1)硅片表面可视化免疫检测方法参数和条件的优化 本文为建立硅片表面可视化免疫检测方法，对如下参数和条件进行了优化:硅片表面功能化条件的优化;PMMA修饰表面的活化时间与旋涂液浓度的优化;固定抗体的相关参数包括固定抗体浓度，抗体稳定剂，包被环境湿度以及固定抗体干燥时间的优化;磁颗粒的选择优化;反应体系pH值的优化;反应温度的优化等。最终确立了硅片表面可视化免疫检测方法的最佳参数和条件。 (2)硅片表面可视化免疫检测方法的建立与评价 通过对硅片表面可视化免疫检测方法的参数和条件的优化，以及四种心脏标志物NT-proBNP、cTnⅠ、MYO和CK-MB抗体筛选，建立了四种心脏标志物联合检测的硅片表面可视化免疫检测方法。同时，采用实际人血清样本评价了方法的可行性，结果显示该方法检测的结果与商品化仪器(Roche Cobas e411和Beckman Coulter Access2)检测结果一致，相关系数r＞0.97。 (3)多靶标心衰标志物磁敏免疫快速检测系统参数和条件的优化 在硅片表面可视化免疫检测方法研究的基础上，为建立多靶标心衰标志物磁敏免疫快速检测系统对如下参数和条件进行了优化:GMR免疫检测系统磁颗粒的优化;磁场强度的优化;磁颗粒和标记抗体干燥工艺的优化;FITC内标校准方法的优化;检测范围拓展方法优化;阻断剂消除干扰物（类风湿因子和人抗鼠抗体）影响优化。 (4)多靶标心衰标志物磁敏免疫快速检测系统建立与评价 建立了基于GMR和微流体技术的多靶标心衰标志物磁敏免疫快速检测系统。通过实际人血液样本的分析和临床研究评估，证实了该系统与三菱公司的PATHFAST免疫分析仪的检测结果一致性良好，相关系数大于0.99。该系统可以满足心衰标志物NT-proBNP和cTnⅠ的临床联合检测的需要。