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目的为提高皮瓣缺血再灌注损伤的治疗效果,该实验将热休克蛋白90α(Hsp90α)功能片段与腺病毒相结合,通过病毒转染的方式介入至人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)内。采用点状注射的途径应用于大鼠皮瓣缺血再灌注损伤模型。观察各个时间段皮瓣颜色、毛发生长、坏死面积等宏观现象和HE染色、免疫组化等微观现象。总体探讨携带Hsp90α功能片段的h UC-MSCs对皮瓣缺血再灌注损伤的治疗效果,为后续实验研究提供理论依据及实验基础。方法在本次实验中,我们选用三种质粒(包括目的质粒载体)共同转染293T细胞,并在转然后的一定时间内提取尚未纯化处理的细胞上清液,根据实验需求浓缩纯化细胞上清液,制备成所需滴度的腺病毒原液,超低温冰箱保存。同时取样检测腺病毒的各项指标,以便用于实验研究。其次,在含10%胎牛血清的DMEM(低糖)培养基中培养、传代h UC-MSCs;在状态良好的干细胞中加入制备好的腺病毒,培养一段时间后在电子显微镜下观察并确定转染的最佳MOI值。通过MTT和q PCR检测腺病毒对h UC-MSCs的毒性及转染后h UC-MSCs的增殖能力;细胞划痕实验检测携带目基因的h UC-MSCs迁移效果。然后,选取96只成年大鼠,随机分为携带“F-5”基因组;“空载病毒”组;未转染组;未注射处理组。在无菌环境下制备大鼠腹部3×6cm岛状皮瓣,皮瓣深达深筋膜,钝性分离皮瓣,找到腹壁动静脉(股动静脉分支),玻璃分针小心分离腹壁动静脉与皮肤,最后完全离断腹部皮肤,制备成只有腹部动静脉供血的岛状皮瓣,用微型血管夹夹闭血管8小时。最后,取含有目的基因的h UC-MSCs、携带空载腺病毒的h UC-MSCs和正常h UCMSCs分组培养,制备成浓度为4×105/ml的细胞悬液。待动物模型制备成功后,在腹部岛状皮瓣上选取10个注射点行皮下注射,每个注射点间隔1cm,每点注射量为0.1 ml。为降低实验影响因素,设置注射等量生理盐水组做为对照组。从各实验组中随机选取1天、3天、5天、7天大鼠,全身麻醉,使用数码相机拍照记录皮瓣颜色、毛发生长情况,使用Image-Pro-plus软件评估皮瓣成活面积;HE染色观察皮肤组织层次和毛细血管密度变化;免疫组化(IHC)检测动物皮瓣血管周边CD31表达情况。结果注射携带“F-5”基因h UC-MSCs组的动物模型,腹部皮瓣颜色和毛发生长情况均优于其它实验组,皮瓣存活面积可达16.5cm2,较对照组有明显提高。免疫组化结果显示携带“F-5”基因组的皮瓣血管周边CD31含量远高于空载病毒组、未转染组和生理盐水组。结论实验采用“干细胞/基因”联合治疗的新方法。通过组织工程技术成功将Hsp90α中的“F-5”基因片段转染入h UC-MSCs,并用于改善大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤。通过细胞学和组织学方面的检测验证出携带“F-5”基因片段的h UCMSCs能有效改善皮瓣缺血再灌注损伤。