论文部分内容阅读
本文以多代自交的全雌性黄瓜栽多星（EC1）和多代自交的弱雌性黄瓜北京截头（CC3）为亲本，进行杂交和自交获得F2分离群体，采用同工酶标记、RAPD分子标记和AFLP分子标记等方法对黄瓜性别分化相关遗传标记进行研究。主要结果如下： 在与黄瓜性别分化有关的同工酶标记研究中，对全雌性黄瓜EC1和弱雌性黄瓜CC3及其自交后在F2代分离出的全雌株、强雌株和弱雌株进行了MDH、AAT与POD三种同工酶分析。结果表明，MDH在EC1和CC3之间可找到2个多态性的同工酶位点，但不能在F2群体间不同性别单株区分开；AAT在EC1和CC3之间和F2群体间均无明显差异；POD在EC1和CC3之间和F2群体间均能找到有1～2个差异的同工酶位点。 与黄瓜性别分化有关的RAPD分子标记研究包括DNA提取方法的筛选、优化RAPD反应体系、黄瓜亲本RAPD分子标记多态性随机引物的筛选和黄瓜性别相关的RAPD分子标记筛选四个方面。在DNA提取方法筛选的研究中，2％浓度的CTAB法提取的黄瓜叶片DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点，其A260/280值在1.6-1.8之间，DNA的产量为870.63μg/g。此方法在黄瓜上相对优于其他DNA提取方法，提出的DNA适合进一步RAPD分析。 在进行优化RAPD反应体系研究中，以黄瓜基因组总DNA为模板，通过对聚合酶链式反应（PCR）体系中Mg2+浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度与dNTP浓度互作、模板DNA的浓度、随机引物的浓度和Taq酶浓度梯度进行试验，结果表明，反应体系为：超纯水12.2μl，Buffer（10x）2μ1，MgCl2（25mM）2μl，dNTP（2mM）1.5μl，Primer（8pmol/rec）1μl，Taq酶（1.5U/rec）0.3μl，TemplateDNA（50ng/μl）1μl时筛选出的PCR反应体系谱带清晰、条带丰富、可重复性好。 在黄瓜亲本RAPD分子标记多态性随机引物的筛选研究中，通过全雌性与弱雌性黄瓜亲本基因组DNA的RAPD-PCR扩增对620条随机引物进行筛选，共有61条随机引物有明显差异。筛选出的引物可进一步用于黄瓜性别相关的分子标记研究。在对黄瓜性别分化相关的RAPD分子标记筛选的研究中，通过对黄瓜亲本显示多态性的61条随机引物对F2分离群体进行扩增，随机引物AK04在1000bp、AK10在200bp、AK20在400bp处产生与性别相关的特异性条带。黄瓜（cucumis sativoL）性别分化相关的遗传标记研究 在与黄瓜性别分化有关的AFLP分子标记研究中，对全雌性黄瓜Ecl和弱雌性黄瓜CC3及其自交后在F:代分离出的全雌株、强雌株和弱雌株进行了AFLP分析.结果表明，全雌性黄瓜ECI和弱雌性黄瓜CC3的人FLP图谱每个泳道有55-64条带，在ECI与Cc3之间至少有6个明显的多态性位点;在FZ代中全雌群体、强雌群体和弱雌群体之间显示出7个多态性条带;在黄瓜不同性型的单株之间每个AFLP引物至少可以发现5个多态性条带。