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白细胞介素15(interleukin-15)是1994年由Grabstein发现的一种多功能细胞因子,与IL-2(interleukin-2)共用IL-2R的β和γ亚单位,二者同属四α螺旋细胞因子家族成员,具有许多相似的生物学功能。能促进T细胞、B细胞的增殖,激活自然杀伤(NK)细胞,提高细胞毒性T细胞活性。许多研究发现,IL-15具有明显的抗肿瘤效应,其抗肿瘤指数甚至高于IL-2,因此,IL-15比IL-2在肿瘤治疗中更具应用前景。
利用肿瘤细胞表面易于生物素化和链亲和素与生物素能高效而超强结合-这两个特性,制备链亲和素(SA)标记的鼠白细胞介素-15融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,并研究其生物学功能。
利用本室早期构建pET24a-SA-L-mIL15和pET21a-mIL15-L-SA重组表达质粒,本研究分别在大肠杆菌中表达融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,对所表达的蛋白分别采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和阴离子交换(DEAE)层析进行纯化,透析复性。MTT法检测融合蛋白对ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)分析融合蛋白对生物素化的小鼠膀胱癌(MB49)细胞表面锚定修饰效率。
SA-mIL15和mIL15-SA在大肠杆菌中实现了高效表达,目的蛋白分别约占细菌总蛋白的20％、35％。制备的SA-mIL15和mIL15-SA融合蛋白纯度均达到95％,并具有双重活性,即:mIL15促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞的增殖活性和SA介导的高效结合至表面已生物素化的MB49细胞的功能(表面锚定修饰效率均大于95％)。其中,SA-mIL15双功能融合蛋白促进ConA激活的小鼠脾淋巴细胞增殖活性为lx106IU/mg,mIL15-SA活性为2x105IU/mg。
SA/mIL15双功能融合蛋白具有双重活性,为mIL15表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研制打下了基础,同时也为hIL15表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的临床试验提供理论基础和实验依据。