青霉素单克隆抗体的制备及其酶联免疫试剂盒的初探

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本研究制备了一株针对青霉素G的单抗,研究结果如下: 用人工抗原BP-BSA免疫BALB/c小鼠,经三次免疫后,分离血清,建立间接竞争ELISA方法并测定血清效价。结果表明:包被抗原(BP-OVA)最适浓度为1μg/ml,血清效价为1:8000,抗体最适浓度为3.6ng/ml。 BALB/e小鼠经BP-BSA第四次免疫5天后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按照10:1的比例进行细胞融合,选择PEG2000作为融合剂。接种在96孔板上,融合率为98%(195/199)。经过4次亚克隆,得到1株能稳定分泌BP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为OF1。运用体内诱生法制备单抗,收集腹水并进行单抗特性的鉴定。经过ELISA检测、染色体技术和SDS-PAGE电泳,表明OF1单抗的亚型为IgG<,1>,轻链为κ型,染色体数为90~105条,分子量为167.3KD,腹水效价为1:8.1×10<5>,亲和常数为3.718×10<7>L/mol。与其结构相似的同系物几乎无交叉反应。 利用单抗建立了检测牛奶样品的间接竞争ELISA法,灵敏度为0.17 ng/ml,试剂盒对牛奶样本的检测下限为3.76 ng/ml,IC50为0.54 ng/ml。建立了标准曲线,回归方程为y=-0.3823x+0.4284,R<2>=0.9958。该方法可用于牛奶中青霉素的残留量检测。
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