M2型肿瘤相关巨噬细胞对结肠癌转移影响的研究

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【目的】  1.在人结肠肿瘤的手术切除标本中检测巨噬细胞及 M2型肿瘤相关巨噬细胞的分布;  2.从诱导分化成熟的M2型肿瘤相关巨噬细胞获得其培养上清,提取胞外体;  3.在体外实验和动物试验中分别探索 M2型肿瘤相关巨噬细胞来源胞外体能否促进结肠肿瘤的侵袭与转移;  4.结合胞外体中miRNAs的Micro Array测序结果,进行体外实验,进一步探索M2型肿瘤相关巨噬细胞来源胞外体对结肠肿瘤侵袭转移的可能机制。  【方法】通过免疫组化及石蜡切片免疫荧光检测人结肠癌标本中巨噬细胞及M2型巨噬细胞的分布。将人单核细胞用GM-CSF、IL-4、IL-13处理,诱导分化为M2型肿瘤相关巨噬细胞,用免疫荧光检测M2型巨噬细胞表面标志CD163表达情况。培养M2型肿瘤相关巨噬细胞,分离、提取其条件培养基中的胞外体,并通过电镜、流式细胞学及western blot进行鉴定。研究M2型肿瘤相关巨噬细胞来源的胞外体对于结肠癌肿瘤细胞系迁移、侵袭、转移的影响,建立裸鼠结肠癌肺转移瘤模型,观察M2型肿瘤相关巨噬细胞来源的胞外体对结肠肿瘤侵袭和转移的影响。通过Micro Array检测胞外体中胞外体的表达,找出其中具有促癌作用的miRNA,通过Real-time PCR、Western Blot及相关效应的阻遏实验,验证测序结果。  【结果】  1.巨噬细胞及 M2型肿瘤相关巨噬细胞主要存在于结肠肿瘤的间质中,且高分化腺癌的肿瘤中,M2的比例较低,较低分化的结肠肿瘤中,M2的比例较高;  2. M2型肿瘤相关巨噬细胞可以分泌胞外体,并可以进入到结肠癌细胞中;  3.通过体外实验证明 M2型肿瘤相关巨噬细胞促进结肠癌的侵袭转移是部分依赖于胞外体的;  4.通过裸鼠肺转移模型证明 M2型肿瘤相关巨噬细胞促进结肠癌的侵袭转移是部分依赖于胞外体的;  5.通过 Micro Array检测到胞外体中有2个 microRNA表达较高,而这群microRNA可以通过多条信号通路促进肿瘤的侵袭转移。  【结论】M2型肿瘤相关巨噬细胞可以分泌外泌体,并通过其中包含的microRNA抑制多条抑癌基因信号通路,从而促进结直肠癌的侵袭与转移。
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