喉癌及癌旁正常黏膜组织中差异表达蛋白的研究

• 作 者: 陈果
• 机 构: 重庆医科大学
• 出 处: 重庆医科大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: 喉癌 癌旁正常黏膜组织 差异表达蛋白 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 质谱分析

目的：　　利用蛋白质组学方法比较喉癌及癌旁正常粘膜组织间的差异表达蛋白，探讨喉癌组织中的特异表达蛋白，为喉癌的特异性诊断提供生物学标记，为研究喉癌的发病机制，寻找与治疗相关的靶标奠定实验基础。　　方法：　　1.取病理确诊的喉鳞状细胞癌组织及无肿瘤细胞侵犯的癌旁正常粘膜组织共5例，临床分期为T1N3M01例、T2N2M01例、T1N2M02例、T1N1M01例。　　2.采用有机溶剂提取法从新鲜喉癌及癌旁正常粘膜组织中提取总蛋白，低温有机溶剂沉淀法纯化总蛋白；用蛋白质双向电泳（2-DE）技术、PDQuest7.1软件获得蛋白质差异表达图谱；通过基质辅助激光解吸/电离时间飞行串联质谱(MALDI-TOF-TOF MS)技术，对所表达的差异蛋白质进行分离、鉴定和初步分析。　　结果：　　1.用2-DE技术获得喉癌及癌旁正常粘膜组织的总蛋白分离图谱，通过PDQuest7.1软件比较分析，获得同一对样本中表达量相差3倍以上的10个差异蛋白质点。　　2.通过MALDI-TOF-TOF MS质谱技术鉴定，喉癌及癌旁正常粘膜组织间差异表达的10个蛋白质点分别为：血红蛋白(hemoglobin)、晶体蛋白（ crystallin）、锰超氧化物歧化酶（ Manganese Superoxide Dismutase）、肌酸激酶（muscle creatine kinase）、视黄醇结合蛋白（retinol-binding protein）、微管蛋白伴侣蛋白辅助因子 A（Tubulin Chaperone Cofactor A）、 SFRS1 protein（ splicing factor, arginine/serine-rich1，SFRS1蛋白）、Annexin V、葡萄糖调节蛋白（glucose regulated protein）、肌球蛋白（myosin）。　　结论：　　1、采用蛋白质双向电泳（2-DE）技术获得蛋白质表达图谱；通过PDQuest7.1软件分析获得了喉癌及癌旁正常粘膜组织间表达差异的10个蛋白质点。　　2、通过对10个蛋白质点的质谱鉴定，结合相关文献资料综合分析，差异蛋白中的血红蛋白、锰超氧化物歧化酶、视黄醇结合蛋白、葡萄糖调节蛋白与肿瘤发生、发展及浸润密切相关；晶体蛋白、肌球蛋白、肌酸激酶、Annexin V可作为临床诊断标志物或治疗的靶标， SFRS1蛋白、微管蛋白伴侣蛋白辅助因子A在喉癌中的作用尚不清楚。本结果为喉癌的特异性诊断提供了实验材料，为探讨喉癌的发病机制，寻找与治疗相关的生物学标记奠定了基础。