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诱导多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS cells)是成体细胞在外源因子作用下,经直接细胞核程序重整而重新获取多潜能的干细胞。iPS细胞在应用上无伦理和免疫排斥问题,其在疾病模型建立与机理研究、细胞治疗、药物发现与评价等方面极具应用价值。迄今,大鼠、人、猪、猴和兔的iPS细胞系皆已建立,并证实小鼠iPS细胞具有ES细胞的发育全能性; iPS细胞在疾病模型研究、药物的发现与评价上已取得重大成果。然而,iPS细胞的研究面临重编程效率低和其成瘤风险两大挑战,基于iPS细胞的肝癌疾病模型未建立。脂肪组织易于大量获取且对供体伤害性小,其来源脂肪干细胞( adipose-derived stem cells, AdSCs)的分离方法简单、快捷。脂肪干细胞作为一个异质性的细胞群体,其自我更新的同时维持向脂肪细胞、肌肉细胞、成骨细胞和软骨细胞类型的特定分化能力。我们认为脂肪干细胞处于分化状态与未分化状态之间,这种状态可能有助于iPS细胞的生成。本课题中,主要的实验方法如下:(1)质粒pMXs-Oct4、pMXs-Sox2、pMXs-Klf4、pMXs-c-Myc和pMXs-EGFP的抽提和逆转录病毒生产;(2)脂肪组织的采集和脂肪干细胞的分离、原代培养与鉴定;(3)逆转录病毒感染脂肪干细胞,脂肪干细胞被重编程为iPS细胞;(4)iPS细胞的培养与鉴定(碱性磷酸酶染色,定量RT-PCR和免疫荧光等)。结果:我们利用逆转录病毒做载体携带转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc重编程50到60岁肝癌患者来源脂肪干细胞为iPS细胞。表明脂肪干细胞能高效地重编程为iPS细胞;我们采用形态学鉴定的方法筛选出iPS细胞;且证实其能在无滋养层的条件下培养。这项研究为成体细胞重编程为iPS细胞的技术改进和建立基于iPS细胞的肝癌模型奠定基础。