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背景目的： 重症肌无力(myasthynia gravis，MG)是T细胞依赖的自身抗体介导的自身免疫性疾病，多数患者体内检出抗乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor，AchR)的自身抗体，主要通过阻断神经肌肉接头处神经递质乙酰胆碱的传递而影响骨骼肌的运动，因此MG属于器官特异性自身免疫病。70-80％MG患者有胸腺增生和胸腺瘤，从胸腺中可检测出抗AchR的自身抗体，从胸腺组织中也能分离出AchR特异性的T淋巴细胞和B淋巴细胞，且从B细胞培养上清中同样检出AchR自身抗体。这些证据说明MG患者胸腺组织中存在自身反应性T细胞和B细胞。目前，胸腺已被公认为是其自身反应性T细胞和B细胞的重要来源，也是B细胞产生AchR抗体并提供特异性T细胞来源的重要场所，与疾病的发生有必然的联系，但迄今人们对胸腺结构的异常与MG发生的关系缺乏较全面的认识。 CCL21属于胸腺中组成性表达的趋化因子。在胸腺CCL21主要表达于髓质区，CCL21和CCL19的受体是CCR7。研究报道，CCR7可表达于经历阳性选择后的双阳性胸腺细胞、和单阳性胸腺细胞，CCL21/CCL19与其受体CCR7相互结合，引导胸腺细胞从胸腺皮质迁移至胸腺髓质。通过对CCL19、CCL21、CCR7基因缺陷小鼠的研究发现，这些小鼠的胸腺细胞不能完成从胸腺皮质向髓质迁移，并因而影响胸腺细胞的成熟和分化。我们前期利用基因芯片筛选MG胸腺差异表达基因，实验结果表明MG患者胸腺中CCR7和CCL21的表达均显著高于正常对照。本研究将CCL21基因转染给分离培养的重症肌无力患者胸腺上皮细胞(TEC)，探讨过表达CCL21对TEC的影响，及与疾病发生的关系。 方法： 1.制作MG患者胸腺组织石蜡切片，应用免疫组织化学技术检测CK、CK8/18、CCL21分子表达及分布。 2.采用SYBR Green实时定量RT-PCR技术，检验MG胸腺组织趋化因子CCL21、CCL19及其受体CCR7mRNA表达水平。采用2-△△Ct法进行MG组和正常对照组的相对定量。 3.用胶原酶Ⅳ消化的方法从MG患者胸腺中分离出胸腺上皮细胞(TEC)，胰蛋白酶消化传代，用免疫组化方法检测TEC CK8/18的表达。 4.pCMV-CCL21转染原代培养的CK8/18阳性TEC-3细胞株，采用实时定量RT-PCR技术检测转染前后，TEC功能性基因表达的变化。 5.采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。所得数据用均数±标准差（(X)±S）表示，两组均数的比较用t检验。计数资料计算阳性率，阳性率之间的比较用X2检验，以P=0.05为检验标准。 结果： 1.免疫组化检测结果表明增生型MG胸腺组织中CK8/18阳性细胞数明显多于正常对照胸腺组织，CK8/18阳性胸腺上皮细胞在增生型MG胸腺组织中皮髓交界处也有较多分布，并且CK8/18阳性TEC多以囊状包裹数个胸腺细胞。 2.实时定量RT-PCR结果显示，与正常胸腺相比CCL21及其受体CCR7在增生型MG胸腺中的表达显著增高，CCL19表达无差异。 3.分离培养的TEC形态典型、TEC的胞体约50-100μm;免疫组化检测结果大多细胞株CK8/18染色阳性。 4.pCMV-CCL21表达载体转染TEC-3后，实时定量RT-PCR结果显示胸腺上皮细胞TEC-3过表达CCL21后其HLA-A、HLA-DR、ICAM-1和CD80基因在mRNA水平上的表达显著增加。 结论： MG患者胸腺组织CCL21及其受体CCR7的表达显著高于正常胸腺; MG胸腺上皮细胞过表达CCL21基因，可引起HLA-A、HLA-DR、ICAM-1和CD80等基因的表达增高。为深入探讨胸腺上皮细胞过表达CCL21基因与MG的发生关系提供实验数据。