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背景/目的：各种病因所引起的慢性肝病绝大多数都有肝纤维化(hepati.fibrosis，HF)，其中25％～40％最终发展为肝硬化甚至肝癌，是一类世界性的严重危害人们健康的主要疾病。目前的研究证实，肝星状细胞(hepati.stellat.cells，HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节。各种因素通过不同方式和途径作用于肝脏中的HSC，导致其生物学及功能变化，引起肝纤维化。研究这群细胞复杂的病理生理机制将是抗纤维化治疗发展的关键。
Wnt信号通路是近年来在分子生物学、细胞生物学和肿瘤研究中的一大热点，参与调控细胞的分化、癌变、凋亡及机体免疫、应激等生理病理过程。最近有研究表明Wnt信号通路与HSC的活化及肝纤维化的发生相关，但有关Wnt信号通路相关分子在HSC活化中的作用尚无全面深入的研究。
本课题首先利用基因芯片技术观察Wnt信号通路相关分子在HSC活化前后表达水平的变化，并用实时聚合酶反应(rea.tim.PCR.RT-PCR)验证部分表达变化基因；进而观察外源性小鼠Wnt5a(recombinan.Mous.Wnt5a，rmWnt5a)蛋白对HSC-T6增殖及I型胶原合成的影响；以期探讨Wnt信号通路在肝纤维化发生中的作用，进一步揭示肝纤维化的发生机制，为肝纤维化的防治提供新的可能途径及干预靶点。
方法：(1).利用胶原酶/链蛋白酶灌注Nycodenz梯密度离心分离大鼠HSC，于体外培养。(2).利用Affymetrix基因芯片观察在HSC活化前后基因谱表达水平的变化，结果中筛选出Wnt信号通路相关分子，以RT-PCR验证部分表达变化的基因。(3).体外培养HSC-T6细胞，加入rmWnt5a蛋白，用CCK-8法检测其对HSC-T6的影响。(4).用ELISA法观察rmWnt5a蛋白对HSC-T6合成I型胶原的影响。
结果：(1).基因芯片结果显示，活化的HSC与新鲜分离的静止的HSC比较，表达上调的Wnt信号通路相关基因共13条(Wisp2、Wnt4、Fzd2、PLC、PKC、TGF-β1、Wisp1、TLE3、Ccnd2、Ccnd1、DKK3、Wifl、RhoA)。经RT-PCR验证了其中2条(Wnt4、Fzd2)，结果与芯片检测结果一致。(2).CCK-8实验结果显示，浓度在0.2μg/mL～0.8μg/mL之间的rmWnt5a具有促HSC-T6增殖作用。当rmWnt5a浓度在0.2μg/mL～0.4μg/mL时，随着其浓度增长，对HSC-T6具有显著的浓度依赖性促细胞增殖作用(p<0.05)。当rmWnt5a浓度在0.4μg/mL-0.8μg/mL时，仅有轻度浓度依赖性促细胞增殖作用的趋势，无统计学上的差异(p>0.05)。(3).ELISA实验结果显示，HSC-T6培养细胞上清液中I型胶原含量随着rmWnt5a浓度增加而逐渐增加。rmWnt5.0.2μg/ml组，0.4μg/ml组、0.8μg/ml组与对照组相比，I型胶原含量均有显著性差异(p<0.05)。
结论：(1).Wnt信号通路参与了HSC的活化，其中可能以非经典通路途径为主；(2).外源性Wnt5a蛋白对HSC的增殖有促进作用；(3).外源性Wnt5a蛋白可增加HS.I型胶原的表达。