【摘 要】
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盐酸氨丙啉(APL)为传统的化学合成类抗球虫药,常作为药物和饲料添加剂用于畜禽疾病的预防和治疗。由于大量和长期使用APL,造成药物在动物组织内残留。因此,检测并限制肉、乳
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盐酸氨丙啉(APL)为传统的化学合成类抗球虫药,常作为药物和饲料添加剂用于畜禽疾病的预防和治疗。由于大量和长期使用APL,造成药物在动物组织内残留。因此,检测并限制肉、乳、蛋等动物性食品中APL的残留日益受到广泛关注。欧盟规定在可食性动物组织中APL的最高残留限量分别为肌肉/皮肤/脂肪/肝脏0.2mg/kg,肾脏0.4mg/kg,蛋为1.0mg/kg。目前检测APL残留的化学方法有分光光度法、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱法(LC),这些化学方法虽然非常敏感、准确,但耗时长、耗资大,人员素质要求高,不适合大量样品的筛选测定,酶联免疫吸附法(ELISA)作为一种快速、特异和灵敏度较高的免疫检测技术正逐渐应用于药物残留的检测。为此,本论文在APL残留检测的酶免疫分析方法方面进行了初步研究工作,以期探讨测定APL残留的灵敏、快速、方便的检测方法,为科学研究与实际应用提供资料。用戊二醛法将APL与载体蛋白偶联制备免疫原,以此免疫BALB/c小鼠,并取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,最终获得一株能分泌抗APL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为APL-3D2-11-(7)。建立起间接竞争ELISA的测定方法。方阵实验确定包被抗原最佳包被浓度(1:6000),腹水最佳稀释度(1:500),酶标抗体的最适工作浓度(1:10000)。以APL浓度的对数为横坐标,抑制率为纵坐标,绘制标准曲线。用该法确定的检测限为0.797ng/100ul,定量限为1.502ng/100ul;建立的间接竞争ELISA方法的批内和批间误差分别为1.30% ,4.14%。盐酸氨丙啉与硫胺素的交叉反应率小于5%。
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