论文部分内容阅读
背景及目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,已成为危害女性健康的最严重疾病之一,并且发病年龄越来越趋于年轻化。虽然随着科学技术的迅猛发展,乳腺癌在诊断和治疗等方面取得了很大的进展,但至今仍未完全弄清其确切发病机理,也未找到行之有效的治疗方法。因此,寻找有效的能够干预肿瘤发生、发展的物质成为广大学者关注的重要课题。
近年来,大量流行病学、细胞培养和动物实验研究证实,异黄酮类化合物能够有效地抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡。许多异黄酮类化合物已被证实具有一定的抗肿瘤和预防肿瘤的效果。Pomiferin(又称橙桑异黄酮),为一弱植物雌激素,是在桑橙果实中提取出来的一种异黄酮类化合物。其分子式为C39H34O9。Pomiferin作为抗氧化剂、抗菌剂、类雌激素、止痛等作用已被报道。国内外研究证实,pomiferin能够有效抑制多种肿瘤细胞的增殖,并且和肿瘤的启动、促进和进展有关；其可能机制包括:抑制拓扑异构酶Ⅱ活性、抑制酪氨酸蛋白激酶活性、诱发癌细胞凋亡抑制多种癌细胞的生长、通过抗氧化作用抑制癌症的发生和进展、性激素的调节等。从目前资料看,pomiferin对乳腺癌细胞抑制作用研究还不明确,尤其是对干预乳腺癌细胞生长机制的研究还比较欠缺。
间隙连接是细胞间连接方式的一种,由间隙连接蛋白(connexin,Cx)所构成。相邻细胞间通过间隙连接所介导的细胞间隙连接通讯(gap junctionintercellular communication,GJIC)进行着信息和物质能量交换,参与细胞间物质交换的代谢偶联和电信号传递的电偶联,对细胞的新陈代谢、内环境的稳定、增殖和分化等生理过程起重要的作用。Cx43是一种主要的细胞间隙连接蛋白,它在细胞膜上成簇出现形成间隙连接斑。近年来许多研究表明,多种癌细胞中都有Cx43表达的下降,Cx43基因表现出肿瘤抑制基因的特点。
含锰超氧化物歧化酶(MnSOD),是体内主要的超氧阴离子自由基清除剂,保护细胞免受活性氧的损伤。超氧化物歧化酶2(SOD2)基因SOD2基因的变异可以影响其编码的锰超氧化物岐化酶(MnSOD)的蛋白质结构和功能,影响MnSOD向细胞内正常位置的转运和活性水平。正常情况下MnSOD存在于细胞内的线粒体内,保护细胞免受在细胞代谢过程中产生的自由基的损害。近年研究发现,SOD2的基因表达量伴随细胞的癌变过程呈正相关下降,提示SOD2基因系潜在的新型肿瘤抑制基因。
肿瘤细胞的侵袭和转移是其主要的致死因素,转移过程是以侵袭为基础发生的,因此侵袭是转移的先决条件和前提。肿瘤细胞具有侵袭的特征,能够穿过基底膜形成侵袭转移。因此,有效的抗侵袭、抗转移药物是抗肿瘤治疗能否成功的关键所在。
基此,本研究旨在探讨和评估pomiferin对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用及可能分子机制。
方法：用不同浓度的pomiferin干预处理人乳腺癌MCF-7细胞,然后观察对MCF-7细胞的生长抑制作用及细胞形态学的改变；探讨pomiferin对MCF-7细胞侵袭的影响,以及Cx43、SOD2基因的mRNA表达及Cx43蛋白表达水平的变化。(1)采用不同浓度的pomiferin(1.5 mg/L,3 mg/L,6 mg/L,12 mg/L,24mg/L)处理人乳腺癌细胞MCF-7,倒置显微镜观察pomiferin作用后细胞形态学的改变；(2)噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(1.5 mg/L,3 mg/L,6 mg/L,12 mg/L,24mg/L)的pomiferin对MCF-7细胞的增殖抑制作用；(3)通过Transwell小室实验检测pomiferin对MCF-7细胞侵袭能力的改变。实验分2组,每组5个研究对象,每组分别加入pomiferin药物1.5 mg/L,3 mg/L,6 mg/L,12 mg/L,24mg/L。一组处理一天,另一组处理2天后,实施Transwell小室实验；(4)采用RT-PCR检测pomiferin干预处理MCF-7细胞后Cx43、SOD2基因的mRNA表达状态；(5)通过Western blot方法检测pomiferin干预处理MCF-7细胞后Cx43蛋白表达水平的变化。
结果：
1.Pomiferin对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖有显著的抑制作用。Pomiferin处理后人乳腺癌细胞MCF-7的形态有明显的改变,并与pomiferin存在剂量关系,剂量愈高形态变化愈明显。
2.Transwell小室检测结果显示,Pomiferin可以剂量依赖性地减弱MCF-7细胞的侵袭能力。
3.RT-PCR检测结果显示,Pomiferin可诱导人乳腺癌MCF-7细胞的Cx43、及SOD2基因的mRNA表达,并呈剂量依赖性。
4.Western blot检测结果显示,Pomiferin可使人乳腺癌MCF-7细胞的Cx43蛋白表达显著升高,且呈现剂量依赖性。
结论：
1.Pomiferin具有显著的抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖效应；
2.Pomiferin对人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭有显著的抑制作用；
3.Pomiferin抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖可能是通过上调Cx43、SOD2的基因表达而介导的。