3’3-二吲哚甲烷阻断STAT3通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、化疗敏感性的影响

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第一部分:33-二吲哚甲烷阻断STAT3通路影响卵巢癌细胞增殖、凋亡的实验研究  目的:检测33-二吲哚甲烷(DIM)对人卵巢癌细胞SKOV3、A2780增殖、凋亡的影响及STAT3、p-STAT3、caspase3、mcl-1、survivin蛋白的变化情况,探讨STAT3信号通路在DIM抑制卵巢癌细胞增殖、凋亡中的作用。  方法:采用MTT法检测不同浓度(50、100、200、400μ mol/L)的DIM在不同的时相点(24、48、72、96h)对SKOV3、A2780细胞增殖的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态,Hoechst33342染色后显微镜下观察细胞核形态学变化;流式细胞术检测DIM对SKOV3、A2780细胞凋亡率和细胞周期的影响;Western blot检测DIM对STAT3、p-STAT3、caspase3、mcl-1、survivin蛋白表达的影响。  结果:DIM对SKOV3、A2780细胞的增殖具有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05或P<0.01),并呈现时间和浓度依赖性。分别以100、150μmol/L DIM作用于SKOV3细胞48h后,凋亡率分别为(16.41±3.58)%和(31.58±12.35)%,对照组的凋亡率为(5.16±2.07)%,3组间差异有统计学意义(P<0.05)。75μmol/L DIM作用于A2780细胞24h后,G1、G2期细胞比例增加,S期所占细胞比例明显降低(P<0.05)。DIM能上调caspase3蛋白表达(P<0.05),下调mcl-1、survivin及p-STAT3蛋白的表达(P<0.05),但对STAT3总蛋白的表达则无明显影响。  结论:DIM能显著抑制卵巢癌SKOV3、A2780细胞的增殖、促进其凋亡。主要是通过抑制STAT3的活化,进而下调mcl-1、survivin蛋白的表达并上调caspase-3蛋白表达而起作用的。DIM有可能成为一种有效的抗卵巢癌药物。  第二部分:33-二吲哚甲烷阻断STAT3通路提高卵巢癌细胞化疗敏感性的实验研究  目的:检测33-二吲哚甲烷(DIM)增强卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性的作用,并同步检测STAT3、p-STAT3及caspase3、bcl-2、mcl-1、survivin蛋白的变化,探讨STAT3信号通路在DIM调节卵巢癌化疗敏感性中的作用。  方法:将25umol/L、50umol/L、75umol/L DIM与5umol/L、7.5umol/LDDP分别及联合作用于体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞株。采用MTT法检测上述各组细胞的生长抑制率,并根据金氏公式计算出q值。Western blot检测75umol/L二吲哚甲烷、7.5umol/L顺铂分别以及联合作用于SKOV3细胞株24h后STAT3、STAT3(phospho Y705)、caspase3、bcl-2、mcl-1、survivin等蛋白表达变化情况。  结果:与不同浓度DIM及顺铂单药比较,DIM联合顺铂抑制卵巢癌细胞增殖作用明显增强。在一定浓度范围内,DIM对顺铂的增敏作用呈现对DIM浓度的依赖性。与对照组相比,DIM组、DDP组、联合组p-STAT3、bcl-2、mcl-1蛋白表达量均有降低,且联合组上述蛋白表达量显著低于DIM、DDP单独作用组(P<0.01)。DDP单独作用组survivin蛋白略有升高,联合组则明显降低(P<0.05)。同时,联合组casapese3蛋白的升高也较DIM、DDP单独作用组更显著(P<0.05)。  结论:DIM对DDP具有增敏作用,且作用强度与DIM浓度呈现正相关性。主要是通过抑制STAT3的活化,进而下调bcl-2、mcl-1、survivin蛋白的表达并上调caspase-3蛋白表达而起作用的。DIM与顺铂联合抗肿瘤具有减毒增效的作用。
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