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目的:本研究通过60％四氯化碳油溶液建立肝硬化大鼠模型,以无水酒精选择性栓塞肝硬化大鼠门静脉后,通过检测大鼠肝重与体重比,非栓塞叶PCNA和Ki-67的表达及术后肝功能来了解肝硬化大鼠行选择性门静脉栓塞后对侧肝脏的再生能力和肝硬化大鼠门静脉栓塞的安全性。
方法:
一、肝硬化动物模型的制作:予60％四氯化碳油溶液0.3ml/100g每5天皮下注射一次,5％乙醇代替饮用水,45天后停止用药。停药2周后再行手术治疗。术后病理、大体观察均提示肝硬化。
二、动物分组:
1.正常大鼠(65只):随机取5只作为术前对照组,余60只随机分为3组(n=20):假手术组、门静脉栓塞组、部分肝切除组,每组于术后1天、3天、7天及14天分批处死5只大鼠。
2.肝硬化大鼠(65只):随机取5只作为术前对照组,余60只随机分为3组(n=20):假手术组、门静脉栓塞组、部分肝切除组,每组于术后1天、3天、7天及14天分批处死5只大鼠。
三、手术方式:
1.门静脉栓塞组(PVE):
麻醉(1％戊巴比妥钠40mg/kg,腹腔内注射)后,由正中切口进入腹腔,分离出供应肝左外侧叶、左中叶和中叶的门静脉左支,予血管夹阻断近端,细针穿刺门静脉左支,注入无水酒精(0.3ml/kg)+碘油(3:1),栓塞完毕后行门静脉造影明确门静脉栓塞的肝段,完毕后拔针,棉签压迫穿刺处60秒后关腹。
2.部分肝切除术组(PH):
麻醉(1％戊巴比妥钠40mg/kg,腹腔内注射)后,由正中切口进入腹腔,切断肝脏的韧带,结扎肝左外侧叶、左中叶和中叶的静脉、动脉和胆管,切除肝左外侧叶、左中叶和中叶,止血满意后关腹。
3.假手术组(SO):
麻醉(1％戊巴比妥钠40mg/kg,腹腔内注射)后,由正中切口进入腹腔,切断肝脏的韧带,关腹。
肝组织病理学变化采用苏木精-伊红染色;肝脏非栓塞叶、残肝组织采用免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67的表达;检测肝功能:包括血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransfcrase,AST);称肝重和体重:计算再生肝叶(肝右叶、尾叶、乳突叶)肝重/体重。所有数据采用SAS9.0软件进行统计学分析。
结果:
1.肝功能结果显示:
(1)正常大鼠组:ALT、AST呈一过性改变,表现为各组术后第1d升高明显(p＜0.05),并到达高峰,第3 d即开始下降,第14 d时基本恢复到术前水平(p＞0.05)。术后第1 d,PVE组和PH组较SO组明显升高(p＜0.05),PH组较PVE组明显升高(p＜0.05)。
(2)肝硬化大鼠组:ALT、AST呈一过性改变,表现为各组术后第1 d升高明显(p＜0.05),并到达高峰,第3 d即开始下降,第14 d时PVE组和SO组基本恢复到术前水平(P＞0.05),PH组仍高于术前水平(p＜0.05)。术后第1 d,PVE组和PH组较SO组明显升高(p＜0.05),PH组较PVE组明显升高(p＜0.05)。术后1 d肝硬化PVE组血清A L T、AS T显著高于正常PVE组(p＜0.05)。术后1 d肝硬化PH组血清A L T、A S T显著高于正常PH组(p＜0.05)。
2.大鼠再生肝叶肝重/体重:
(1)正常大鼠组:SO组手术前后再生肝叶肝重/体重无明显变化,PVE组和PH组从术后3 d开始再生肝叶肝重/体重较术前明显增加(p＜0.05),与SO组相比有显著性差异(p＜0.05)。术后3 d、7 d、14 d PH组较PVE组增加(p＜0.05),三组中PH组再生肝叶肝重/体重增加最显著。
(2)肝硬化大鼠组:SO组手术前后再生肝叶肝重/体重无明显变化,PVE组和PH组从术后3 d开始再生肝叶肝重/体重较术前明显增加(p＜0.05),与SO组相比有显著性差异(p＜0.05)。术后7 d、14 d PH组再生肝叶肝重/体重较PVE组增加(p＜0.05);三组中PH组再生肝叶肝重/体重增加最显著。术后14 d正常PVE组再生肝叶肝重/体重较肝硬化PVE组增加(p＜0.05),术后14 d正常PH组再生肝叶肝重/体重较肝硬化PH组增加(p＜0.05)。
3.免疫组织化学改变:
(1)正常大鼠组:在正常组的肝组织中,术前PCNA、Ki-67有少量表达,术后1d PVE组和PH组再生肝叶PCNA、Ki-67的表达较术前显著增加(p＜0.05),并达高峰,PH组较PVE组增加明显(p＜0.05),随后逐渐下降。
(2)肝硬化大鼠组:在肝硬化组的肝组织中,术前PCNA、Ki-67有少量表达,但较正常组增多(p＜0.05),术后1d PVE组和PH组再生肝叶PCNA、Ki-67的表达开始增加,并于术后7d达到高峰(p＜0.05),PH组较PVE组增加明显(p＜0.05),随后逐渐下降。
结论:
1.正常大鼠选择性门静脉栓塞后对侧肝脏有强大的再生能力。
2.肝硬化大鼠选择性门静脉栓塞后对侧肝脏有再生能力,但再生能力较正常肝脏差。
3.肝硬化大鼠行门静脉栓塞是安全、可靠的。