论文部分内容阅读
目的:建立鼻咽癌HNE2放射不敏感细胞系，即HNE2-NRC，研究HNE2-NRC与HNE2细胞系中P53磷酸化的差异性表达，并在鼻咽部组织芯片中检测P53 Ser376位点磷酸化水平，探讨P53蛋白磷酸化与鼻咽癌治疗反应的关系。 方法:通过亚致死射线剂量、递增射线剂量反复照射人鼻咽癌细胞株HNE2的方法建立放射不敏感细胞株HNE2-NRC。以HNE2-NRC及HNE2为研究对象，观察不同的放射剂量照射前后细胞形态、细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的变化。倒置显微镜下观察细胞形态的变化，克隆形成实验观察细胞克隆形成率及生长曲线、 MTS法测定放射线照射后细胞增殖抑制。流式细胞术检测HNE2-NRC及HNE2细胞周期的差异。Western Blotting测定HNE2-NRC与HNE2细胞系中P53磷酸化的差异性表达，免疫组化法检测鼻咽部组织芯片中P53 Ser376位点磷酸化水平。 结果:克隆形成实验表明HNE2-NRC较HNE2克隆形成力强，放疗增敏比SER为0.796＜1。MTS实验检测到HNE2与HNE2-NRC相比，生长受到抑制，在6h、2d、6d、8d时差别均有统计学意义。流式细胞检测两株细胞周期具有差异，HNE2 G2/M期细胞比率为23.88％，而HNE2-NRC G2/M期细胞比率为10.84％，且HNE2-NRC G0/G1期细胞比率增加。Western Blot结果显示 HNE2-NRC与HNE2相比，P53、P53 Ser15、Thr81、Thr55、Ser389磷酸化水平升高，而Ser6、Ser9、Ser315、Ser376磷酸化水平降低。免疫组化染色检测鼻咽部组织芯片中P53 Ser376表达，放疗后生存期＜5年的患者与放疗后生存期＞5年的患者相比较，P53Ser376磷酸化水平有降低的趋势。 结论: 1、本研究建立了放射不敏感细胞系HNE2-NRC，与亲本细胞HNE2相比，具有耐放射的生长特性。 2、在HNE2-NRC细胞中，P53 Ser15、Thr55磷酸化水平升高;而P53 Ser315、Ser376发生去磷酸化，提示P53相关位点的磷酸化特征谱与鼻咽癌放射抵抗相关。 3、在组织芯片水平，P53 Ser376磷酸化水平与放射治疗的鼻咽癌病人预后呈一定的相关性，进一步提示P53磷酸化谱作为放疗敏感性预测的可能性。