微流芯片在人类血清生物标记物免疫检测中的应用

• 作 者: 王静雯
• 机 构: 北京大学
• 出 处: 北京大学
• 发表日期: 2011年期
• 关键词: 免疫检测 血清生物标记物 微流控芯片 临床检测

微流控芯片是以微管路为特征,对微管道内流体的控制达到分析或分离等目的的技术。其理念始于1990年,Manz首次提出“微型全分析系统”(μTAS)的设想。自此各研究者致力于将常规分析检测实验转移向微流芯片技术上,分别从固相基底修饰、进样方式、管道设计等方面所做的改良工作,所获得的成果验证了微流芯片检测技术的优越性。　　
本文在前人研究的基础上搭建了微流芯片平台,微流芯片利用光刻蚀技术制备。该芯片由控制层,流体层固相载体三个部分构成,利用PDMS膜弹性,用控制层微管路来限制流体层微管路内的液体流动。反应室由Quake阀构建而成,称为“Button”,其密度大于150个/平方厘米,体现了高通量检测能力。　　
为利用该微流平台顺利实现免疫检测实验,本文做了大量优化工作,优化对象包括固相基底、封闭液、包被液、包被时长、进样速度、Button面积等。最终通过定性和定量分析,得到了最佳的实验条件和参数:固相基底可选择坏氧基修饰玻片和PDMS,各有所长;封闭液选择含10mM Tris和1％BSA的PBS;包被液选择pH9.4的碳酸缓冲溶液;包被时长为15分钟最佳;进样速度控制在约300nl/min;Button面积占阀门一半。在这些条件下,得到良好的检测效果。　　
为验证该微流控装置相比同类具有优势,本文利用已经优化的参数,采用双抗夹心ELISA方法,建立了人IgG标准曲线。该标准曲线检测限为0.174 pg/ml,灵敏度高于目前同类研究。另外,线性范围1 pg/ml-10 ng/ml,组内CV和组间CV大多落在10%以及20%以下,全部操作仅在1小时内完成。基于此显著优势,将此芯片进行改良,对肠癌病人血清CEA进行临床检测。其所测浓度与同常规检测相近,而组间CV值较小,操作更加方便快捷。　　
结果表明,该微流芯片平台,是适用于免疫临床检测的装置。