【摘 要】
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构建了银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎抑制性差减杂交cDNA质粒文库,合成了银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎SMART cDNA.对银鲫原肠期739个和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交,得到
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构建了银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎抑制性差减杂交cDNA质粒文库,合成了银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎SMART cDNA.对银鲫原肠期739个和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交,得到72个原肠期和98尾芽期斑点杂交阳性克隆.72个原肠期斑点杂交阳性克隆中包括19个已知基因和31个没有同源性的cDNA片段.在19个已知的基因中,6个在其它物种仅有核酸序列报道,并且与其它物种相应序列的同源性较低,功能尚不清楚.98个尾芽期斑点杂交阳性克隆中包括52个已知的基因和37个没有同源性的cDNA片段.在52个已知的基因中,11个在其它物种仅有核酸序列报道,功能尚不清楚.从差减文库共得到170个斑点杂交阳性克隆,包括17个在其它物种仅见核酸序列报道及68个没有同源性的cDNA片段.用虚拟Northern杂交和RT-PCR检测了部分克隆在银鲫胚胎发育中的表达特性.用RACE-PCR克隆到在银鲫胚胎发育中6个差异表达基因的全长cDNA,并对其特征进行了分析.GPOU2为卵巢特异.GPOU2存在母源性转录本,在胚胎发育中,从桑椹期开始表达,直到尾芽期一直可检测到转录产物.GMDK2基因在成鱼脑中大量表达,在其它组织表达较弱.在胚胎发育中,GMDK2从原肠期开始表达,直到幼苗期一直检测到其转录产物.GPOU2和GMDK2与斑马鱼新近报道的POU2和MDK2氨基酸序列同源性分别为91％和97％,都与脑发育相关.GHE1、GHE2是银鲫的两种孵化酶基因,从尾芽期到幼苗期一直可检测到其转录产物,但它们在成鱼组织不表达.G366是一个新基因,从成熟卵母细胞到幼苗期一直检测到其转录产物,但该基因从尾芽期开始在mRNA水平上表达减弱.在组织中都检测到G366 mRNA转录本,但在卵巢表达较强.在蛋白水平上,G366在胚胎发育中没有明显表达差异,但在成鱼组织,只在卵巢检测到表达.用G366抗体检测两性生殖彩鲫组织抽提液,与在银鲫中的结果一致.G685是一个新基因,在mRNA水平上没有检测到母源性转录产物.最早检测到其表达是在囊胚早期,在原肠期表达最强,随后表达减弱,一直到幼苗期都检测到其转录产物.在组织中都检测到G685 mRNA转录本,但在精巢和肝脏表达较强.
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