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目的:近年来自然灾害频繁发生,如雪灾、地震、海啸等给各国、各地区的人民造成了巨大的伤痛和损失。如何在这些重大灾难发生现场展开及时有效的救治工作已成为我们面临的一项紧迫任务,在应急处理过程中,急性感染尤其是急性化脓性感染、严重的组织损伤等这些灾害现场常出现病理中性粒细胞增多,因此快速准确地检测中性粒细胞数目对于上述疾病诊断和病情估计具有决定意义。POCT是一种近年来强势发展的在患者身边分析患者样品的检测技术,其主要特点是操作简单、使用方便。因此,本课题从有效反映受伤人员感染的血液中性粒细胞入手,最终目标为研制出一种便携、操作简单、无需电力供应、无需专用场地、快速准确、样本微量化的检测血液中性粒细胞的POCT产品。方法:1.Percoll分离中性粒细胞采用加用葡聚糖和不加用葡聚糖的两种Percoll密度梯度离心法,比较两种方法的优缺点,选择其中较好的方法为后续实验使用高纯度的中性粒细胞做准备。2.中性粒细胞中酯酶活性的测定参考骨髓粒细胞特异性酯酶染色方法及尿干化学试纸条检测粒细胞酯酶的方法,从而选择一种能够反映血液中性粒细胞数量的方法。结果:不加葡聚糖的Percoll密度梯度离心法简便省时、分离效果好、提取细胞纯度高、细胞活性达99%以上。采用尿干化学试纸条可检测血液样本中的中性粒细胞,而骨髓粒细胞特异性酯酶染色方法不能用于测定血液中性粒细胞的数量。进一步研究尿干化学试纸条用于稀释血液样本中性粒细胞的检测,结果发现试纸条上白细胞模块颜色的深浅随着中性粒细胞稀释液浓度(0-500/μl)的变化而变化。结论:1、不加葡聚糖的Percoll密度梯度离心法简便省时、提取细胞纯度高、细胞存活率高,为后续实验研究中性粒细胞做好了准备。2、采用尿干化学试纸条可检测血液样本中的中性粒细胞,但是仅限于中性粒细胞浓度为0-500/μl的稀释血液样本。而血液样本中性粒细胞的浓度远大于此值,故在后续实验中将以此方法为基础,探讨通过调整试纸条上与粒细胞酯酶反应底物的浓度,以期能够直接测定血液样本的中性粒细胞。