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目的：
线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)缺乏组蛋白的保护，其损伤修复系统也不完善，mtDNA所在的位置与线粒体内ROS产生的位点相接近，故mtDNA极易在多种损伤因子的作用下发生突变，尤以D-loop区的突变率最高。目前已经在包括乳腺癌在内的多种肿瘤中发现了mtDNA突变[14]，并推测mtDNA的突变在肿瘤的发生、发展中起作用。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，我国虽属乳腺癌低发国家，但近年来其发病率亦有明显上升趋势，已经成为严重威胁我国女性健康的主要疾病之一。本研究中我们通过对乳腺癌中D-loop区突变情况的分析，对mtDNA D310的微卫星不稳定的分析，以及对16189位点多态性的分析，进而阐述mtDNA D-loop区的突变与乳腺癌间的关系。
方法：
收集乳腺癌(breast cancer，下文以BC表示)病例72例，良性乳腺疾病(benign breast disease，下文以BBD表示)病例56例，以及可以排除乳腺肿瘤等妇科肿瘤，排除常见的与线粒体有关的疾病的正常对照(normal control，下文以NC表示)标本。利用PCR扩增、产物纯化和直接测序等技术，通过患者自身外周血与灶区组织对照来确定是否突变，结合临床资料，以72例BC患者为实验组，56例BBD患者为对照组，对两组病人的D-loop区突变情况进行分析，以分析癌症患者与良性乳腺疾病间的突变是否有差别。此外，我们还建立了涵盖116例正常人血液标本D-loop区序列的健康对照基因库，将患病组和健康人群的mtDNA D310区的微卫星不稳定(microsatellite instability，MSI)和16189位点的多态性进行比较分析。
结果：
1.在所测得的72例BC标本mtDNA D-loop区序列中，61例未发现突变，11例标本发现突变，突变比例为15.3％，突变位点数为13个，突变位点集中位于HVRⅠ(7/13)和HVRⅡ(5/13)。在所测得的56例BBD标本mtDNA D-loop区序列中，43例未发现突变，13例标本发现突变，突变比例为23.2％，突变位点数为17个，突变集中位于HVRⅠ(3/17)和HVRⅡ(10/17)。其中9个突变位点于位于MT-OHR(nt110-441)，7个位于7S DNA(nt16106-191)，1个位于线粒体转录因子(mitochondrial transcription factor1，mtTF1)结合位点，3个位于D-loop区的其它区段。BC组与BBD组的突变比例非常接近，二者无统计学差异。
2.将D-loop区突变情况与BC患者、BBD患者的年龄、肿块大小、ER水平、是否转移等因素的关系进行统计学分析，发现突变的分布情况在癌细胞发生转移和未发生转移两组间存在显著差异。22例癌转移的乳腺癌病人中均无D-loop区的突变，47例未发生癌转移的乳腺癌病人中有11例存在D-loop区的突变，p值为0.014(<0.05)。
3.我们对72例BC病例，56例BBD病例，及116例NC的血液标本进行16189位点的多态性分析，发现BBD组中84％的乳腺纤维腺瘤患者为16189 T，BC组中62.5％的患者为16189 T，统计分析发现两组间具有显著性差异，p值为0.047。其余组间两两比较均无显著差异。
4.对所有标本的D310区进行MSI分析显示，BC组中55.5％(40/72)的病人存在MSI，BBD组中71.4％(40/56)的病人存在MSI，NC组中66.4％(77/116)的病人存在MSI。BC组中D310区的MSI较其余两组明显偏低。
结论：
1.乳腺癌转移组中无一例病例存在D-loop区的突变，乳腺癌未转移组中23.4％(11/47)的病例出现D-loop区的突变。其中，未转移组的突变位点集中位于两个高变区(10/11)，其中5例位于HVRⅡ，5例位于HVRⅠ。虽然我们的研究数据显示D-loop区的突变与乳腺癌是否发生转移之间的关系在统计学上具有统计意义(经卡方检验p值为0.014<0.05)。但是，查阅文献尚未见有相关报道。因此，在此尚无法下结论，仍需大量的实验数据支持，以及进一步的研究。
2.BF组的16189T分布比例明显高于其他组，提示，16189位点变异为T或可能有更高的乳腺纤维腺瘤发病风险？同时，在BC和NC组间该位点的多态性分布情况非常接近，显示该位点的多态性与乳腺癌间没有显著相关性。
3.对各组标本的D310区MSI分析结果显示，各组的MSI比例接近，无统计学差异。但仍能发现BC组中D310区的MSI比例较其余两组明显偏低，需加大样本量进一步实验。