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研究目的近年多个流行病学研究发现,应用促性腺激素释放激素类似物(gonadotropin-releasing hormone analogues,GnRH-a)可使多种激素依赖性肿瘤的发病率和死亡率有所下降。然而此类的相关研究多集中于子宫内膜异位症、子宫肌瘤、卵巢癌、乳腺癌和前列腺癌等方面,对子宫内膜癌的作用如何却很少有报道。本研究以子宫内膜癌细胞系HEC-1B为对象,观察不同浓度醋酸曲普瑞林对HEC-1B细胞增殖活性的影响;以及它对子宫内膜癌细胞中C-myc、PTENmRNA表达的影响,为GnRH-a治疗早期子宫内膜癌提供一定的实验依据。材料与方法1.材料:人子宫内膜癌细胞HEC-1B;醋酸曲普瑞林2.方法:将该细胞体外培养后,分别用0mol/L,10-9mol/L,10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L,10-5mol/L药物浓度的培养液培养24、48、72、96小时。待测。主要观测内容1.检测相同时间点,不同药物浓度各组细胞的抑制率;检测相同药物浓度,不同作用时间点各组细胞的抑制率。检测使用MTT法。2.检测HEC-1B细胞中C-myc蛋白和PTEN蛋白的表达。检测使用免疫组织化学ABC法。3.观察加药前后HEC-1B细胞的形态学变化。使用倒置相差显微镜。4.检测不同药物浓度作用下,同一时间点(96h)C-myc mRNA和PTEN mRNA的表达情况。检测使用RT-PCR法。结果1.在同一时间点,随着药物浓度增加,细胞抑制率增高,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);在同一浓度,随着作用时间延长,细胞抑制率增高,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。2. HEC-1B细胞中C-myc蛋白表达阳性,PTEN蛋白表达阴性。3.加药后,可见细胞密度明显降低,细胞体积缩小,胞体变圆,细胞间隙明显增大,胞内出现明显空泡结构。4.在同一时间点,随着药物浓度增加,C-mycmRNA的表达逐渐下降,PTENmRNA的表达逐渐上升,两者呈负相关。结论1.醋酸曲普瑞林对HEC-1B细胞的增殖具有抑制作用,且这种抑制作用有较好的时间依赖性和剂量依赖性。证明了GnRH-a类药物抗子宫内膜癌的有效性。2. HEC-1B中C-myc呈阳性表达,PTEN呈阴性表达。提示C-myc和PTEN在子宫内膜癌的发生发展过程中起着重要的作用。3.醋酸曲普瑞林可使HEC-1B细胞形态发生明显的改变。4.醋酸曲普瑞林可以有效的使细胞中的C-mycmRNA的表达下调,PTENmRNA的表达上调,两者呈负相关。这提示醋酸曲普瑞林通过下调C-myc和上调PTEN来达到抑制子宫内膜癌细胞增殖的作用。