论文部分内容阅读
【目的】上皮性卵巢癌病死率位居女性生殖系统肿瘤首位。大多数患者就诊时病情已经属于晚期,虽然大部分病人在经过肿瘤减灭术和以铂类为基础的化疗药物治疗后病情可以得到不同程度的缓解,但是绝大多数患者都会面临复发及复发耐药的问题,导致患者预后极差。目前关于卵巢癌化疗耐药的机制尚不清楚。因此,卵巢癌的治疗使妇产科医生和患者陷入重大困境。本研究旨在探讨microRNA加工成熟过程中的重要工具酶Dicer1的表达水平与卵巢癌铂耐药之间的关系,以丰富卵巢癌耐药的相关理论,并为卵巢癌的治疗提供新的思路。【方法】本实验的主要研究方法是:首先选取2005年-2013年在同济医院手术的168例病理确诊为上皮性卵巢癌患者的病理切片,通过免疫组化的方法检测患者Dicer1的表达,结合临床治疗耐药情况,分析Dicer1表达高低与患者耐药及预后的相关性,并在卵巢癌细胞株中验证;通过挖掘数据库TNE CANCER GENOME ATLAS(缩写TCGA)中可利用的高级别浆液性卵巢癌的数据,在mRNA水平对Dicer1表达相关的基因进行富集分析,在卵巢癌细胞中通过RT-qPCR和Western Blot检测验证基因富集分析的结果;通过分析出Dicer1差异表达相关的microRNA,并与目前公认的miRNA靶基因预测数据库(miRBase、miRPathDB、miRDB、miRTarBase)中所得的与Dicer1相关的MicroRNA取交集,选出Dicer1调控铂耐药的靶miRNA;利用卵巢癌细胞株验证Dicer1及其调控基因引起铂类耐药;并在动物体内实验验证耐药。【结果】(1)免疫组化分析结果结合患者治疗耐药情况显示,患者铂耐药与Dicer1低表达明显相关,并且Dicer1低表达时患者无进展生存(PFS)和总生存期(OS)缩短;在卵巢癌细胞株OVCAR3中,shRNA下调Dicer1表达后,细胞对顺铂的耐药性增加;(2)TCGA数据分析Dicer1表达相关基因,发现与线粒体功能相关的基因明显富集,如氧化磷酸化等;并在OVCAR3细胞中得到验证;(3)Dicer1低表达引起线粒体功能调控相关基因PGC-1α的表达增高;通过TCGA数据库及miRNA数据库筛选对PGC-1调控的miRNA,得到Mir148b,并在卵巢癌细胞系中验证了Dicer1通过mir148b对PGC-1α的调控作用;(4)体外细胞实验及体内动物实验均显示Dicer1通过PGC-1α导致顺铂耐药。【结论】Dicer1下调减少mir148b表达,导致PGC-1α表达增多,造成卵巢癌对顺铂耐药。本研究揭示了铂耐药的另一种作用机制,据此有望提出新的卵巢癌治疗策略,改善患者预后。