论文部分内容阅读
对虾白斑综合症病毒(WSSV)是困扰对虾养殖业最主要的病原体,目前人们对它的侵染机制还不完全的了解。与其他DNA病毒相似,WSSV的基因转录通常具有时相性的特征,根据转录时间的不同可以细分为极早期基因、早期基因、晚期基因。本研究选出其中三个极早期基因wsv051,wsv056,wsv083进行研究,5’RACE实验具体找到这三个极早期基因的起始转录位点,发现wsv051的起始转录位点位于ATG上游366nt处,wsv056的起始转录位点位于ATG上游227nt处,wsv083的起始转录位点位于ATG上游113nt处。wsv051,wsv083的起始转录位点位于预测的。TATA box下游23nt处,wsv056可能不受TATA box调控影响。将这三个极早期基因的ATG上游约600bp的启动子序列单独克隆至缺少启动子序列的pIZ△IE/EGFP质粒中,使得GFP报告基因的转录在WSSV极早期基因启动子的调控之下,并转染至昆虫细胞High Five细胞系中。再通过一系列的启动子的缺失突变,用流式细胞仪定量GFP报告基因的强度寻找出这三个启动子的最强活性区域。此外,还找出wsv083启动子中一段92bp的重要序列,此段序列的有望用于构建表达载体的启动子序列。