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目的：鼻咽癌是一种与EB病毒(EBV)感染相关的肿瘤，其肿瘤细胞表达Ⅱ型潜伏期EBV抗原，包括EBNA1、LMP1和LMP2等。同时，鼻咽癌肿瘤组织局部存在大量淋巴细胞浸润，反映了机体存在针对EBV感染相应的免疫应答。虽然有报道在鼻咽癌患者外周血和活检组织中均能检测到针对EBV的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)，但大多数鼻咽癌患者机体仍处于免疫逃逸状态。调节性T细胞(Treg)是一类具有免疫抑制功能的T淋巴细胞亚群，在肿瘤免疫逃逸中起着十分重要的作用。FOXP3作为决定Treg功能发挥的重要核转录因子，目前被公认为是Treg的特异性标志。此外，Th17细胞是新近发现的一类CD4+T细胞亚群，其主要效应分子IL-17，具有强烈的促炎症作用，在多种自身免疫性疾病中发挥着重要作用。目前关于Th17细胞和IL-17在人类肿瘤中的作用报道较少。因此，本课题以鼻咽癌临床石蜡样本为基础，应用免疫组化双染技术定位及定量鼻咽癌组织内不同肿瘤浸润淋巴细胞亚群，包括：CD8+CTL、Granzyme B+acCTL、FOXP3+Treg及IL-17+Th17细胞，统计分析其各自的阳性细胞数目与鼻咽癌患者临床病理特征的相关性及对预后的影响，并阐明各亚群肿瘤浸润淋巴细胞在鼻咽癌肿瘤微环境中的免疫监视调控作用。
方法：收集2002年2月至2003年11月在我院经病理证实为鼻咽癌的石蜡标本106例。所有患者均为初次诊断且未进行任何治疗，随访时间均超过5年。采用免疫组化双染法检测各亚群免疫细胞相关分子标志，对CD8和FOXP3、GrB和FOXP3、IL-17和FOXP3分别进行双染，观察并计数各免疫指标的表达数目，统计分析其各自的阳性细胞数目与临床病理特征及与鼻咽癌患者预后的关系。
结果：⑴临床病理特征相关性分析鼻咽癌组织中浸润CD8的细胞数目与区域淋巴结转移情况呈正相关(P=0.038)，GrB和FOXP3各自的细胞数目与肿瘤局部侵犯分级呈负相关(P=0.011和P=0.003)，FOXP3的细胞数目与临床TNM分期呈负相关(P=0.043)，IL-17的细胞数目与各临床参数均无相关性。各淋巴细胞亚群的细胞数目之间不存在线性相关，且与LMP1的表达情况无相关性。CD8+FOXP3+的细胞数目与区域淋巴结转移情况呈正相关(P=0.010)，CD8+FOXP3+细胞/CD8+细胞的比率与肿瘤局部侵犯分级呈负相关(P=0.043)，FOXP3+GrB+细胞和FOXP3+GrB+细胞/FOXP3+细胞的比率与各临床特征参数之间均无相关性，与LMP1的表达情况也不存在相关性。在106例鼻咽癌组织石蜡切片染色中均未观察到IL-17+FOXP3+双阳性信号；⑵生存分析在单因素分析中，鼻咽癌组织中FOXP3≤74.00/HPF组患者的总生存期和无进展生存期均高于FOXP3＞74.00/HPF组(P=0.002和P=0.001)，而CD8、GrB、IL-17的细胞数目与鼻咽癌患者的总生存期和无进展生存期均无相关性。肿瘤局部浸润的CD8+细胞/FOXP3+细胞的比率与患者的总生存期和无进展生存期呈负相关(P=0.036和P=0.005)。线性组合分析FOXP3和GrB的细胞数目与鼻咽癌患者的总生存期和无进展生存期呈正相关(P=0.011和P=0.003)。由COX多因素模型分析得到，鼻咽癌局部浸润的FOXP3细胞数目，CD8+细胞/FOXP3+细胞的比率以及组合分析FOXP3和GrB的细胞数目可分别作为独立判断鼻咽癌患者预后的指标。
结论：在本研究中，鼻咽癌局部肿瘤组织内主要以浸润FOXP3+Treg细胞为主，其细胞数目与疾病进展呈负相关，与鼻咽癌患者的总生存期和无进展生存期呈正相关，可以作为一个独立判断鼻咽癌患者预后的因素。另外，CD8+细胞/FOXP3+细胞的比率与鼻咽癌患者的无进展生存期呈负相关，联合分析FOXP3和GrB的细胞数目与鼻咽癌患者的总生存期和无进展生存期呈正相关，这两种联合分析Treg和CTL的方式均可作为独立评价鼻咽癌患者预后的指标。综上所述，FOXP3+Treg在鼻咽癌局部肿瘤微环境中的作用不同于在其他肿瘤中所发挥的免疫抑制效应。